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自1966年发现和证实猪细小病毒(porcine parvovirus，PPV)的存在及致病性以来，国内外学者对其进行了广泛深入的研究，发现其为单链线状DNA病毒，对外界理化因素具有很强的抵抗力，主要引起怀孕母猪流产，产死胎，胎儿木乃伊化等，在世界范围内广泛分布，给养猪业造成了巨大的经济损失。同其它许多病毒病的防制一样，该病也主要以免疫预防为主，由于PPV血清型单一及其高免疫原性，使得疫苗接种成为控制PPV感染的一种行之有效的方法，本文就其疫苗研究综述如下；
1 弱毒疫苗 最早发现和应用于临床的是PPVNADL-2弱毒株，该毒株是将PPV强毒在实验室利用细胞培养连续传代50次以上致弱的，分子生物学研究证实，该毒株的基因组比强毒株PPVNADL-8在VP2基因上少300bp。临床实验证实，血清学阴性的怀孕母猪口服或鼻内接种NADL－2株，尽管有病毒血症存在，却不引起胎儿感染；若将该毒株经子宫内接种，可引起胎儿感染，从而导致繁殖障碍。日本学者Fujisakl等将PPV野毒在猪肾细胞上低温(30℃)连续传54代，产生了HT变异株，该毒株接种猪后不产生病毒血症，但能诱导产生高滴度的抗体和较强的免疫力。在此基础上，Akihiro等将HT株在猪肾细胞上培养并用紫外线照射后传代，获得了安全性更好的HT-SK-C株，利用该毒株生产的弱毒疫苗已在日本商品化。我国学者对PPV弱毒苗也进行了研究，蒋玉雯等从广西初产母猪所产死胎脏器中，分离出一株PPV自然弱毒株。用该毒株接种PPVHI抗体阴性的4月龄猪和怀孕14～23d的后备母猪，结果不产生病毒血症，母猪分娩正常，所产小猪吃奶前HI抗体阴性。另外，免疫的怀孕母猪用强毒株攻击后49d剖杀，胎儿发育正常，胎心采血HI抗体阴性，取胎儿脏器进行组织培养也未分离出病毒，而对照猪攻毒后产生了病毒血症并导致繁殖障碍，从胎儿脏器中分离出ppv。尽管已有多株弱毒疫苗在临床上应用，但是由于PPV强毒株的大量存在，人们对病毒重组及弱毒返强的担心一直使弱毒苗的应用受到一定限制。
2 灭活疫苗
2．1 单价灭活疫苗 自1976年国外就有关于PPV灭活疫苗的研究报道，并于80年代在美国、澳大利亚、法国等国家普遍应用。在我国，潘雪珠等研制成功PPV灭活疫苗之后，韩孝成等、肖驰等、邬捷等、吕建强等也先后研制出PPV灭活疫苗。PPV灭活疫苗的研制中，应用的灭活剂有福尔马林、-丙内酯(-PL)、AEI(N-乙酰乙烯亚胺)以及BEI(二乙烯亚胺)等。Fujisaki用福尔马林灭活病毒制成的疫苗，免疫动物诱导产生了较高的抗体滴度，但保护效果不理想；潘雪珠比较了福尔马林和AEI的灭活效果，证实AEI优于福尔马林；Joo等用-丙内酯灭活的疫苗，可使猪产生的抗体至少持续4个月以上。免疫佐剂是影响PPV灭活疫苗效果的重要因素，Moliter等比较了13种不同佐剂用于PPV灭活疫苗的效果，结果发现50％氢氧化铝胶，顺丁烯乙酰(EMA)、CP-20961(Avridin)，油水乳剂及dimethyl-dioctadecyl-ammoniumbromide(DDA)作佐剂的疫苗，均诱导猪产生了高滴度的抗体，而用油佐剂、SDS、L-121、氢氧化铝和油乳剂混合物、SDS和氢氧化铝混合物作佐剂的疫苗产生的抗体滴度均较低。目前在PPV灭活苗的制备中，经常采用的佐剂是氢氧化铝和油水乳剂。
2.2 灭活二联疫苗 PRV，PPV和JEV病均是引起母猪繁殖障碍的主要疾病，研制出灭活多联疫苗可以简化免疫程序，降低临床应激反应，适合规模化养猪业的发展趋势。Mengeling等将通过细胞培养增殖的PPV和PRV，用AEI在37℃灭活后混合，加入10％的Al(OH)3制成灭活二联疫苗用于免疫预防试验。16头后备母猪进行两次免疫，间隔期为2周，8头母猪在妊娠后9周用PRV攻击，8头母猪在妊娠后6周用PPV攻击，然后分别在第13周和12周宰杀，观察保护情况。结果发现，16头母猪均未发生繁殖障碍，从胎儿体内未检出PRV和PPV。对免疫母猪的血清学检测结果证实，经二次免疫后，母猪的PRV中和抗体和PPVHI抗体滴度，与采用单苗免疫的抗体水平相当或稍高，从而说明PRV-PPV灭活二联疫苗具有良好的免疫保护作用。井出诚弥等曾用PPV和JEV二种病毒的弱毒疫苗混合后免疫母猪，产生的PPV和JEV抗体水平分别与相应单苗的相同。国内邬捷等用PPV灭活苗与JEV灭活苗混合或同时免疫后备母猪均取得了满意的效果。姜天童等利用幼龄胎猪生产PPV、利用小鼠增殖JEV后，分别灭活制成灭活二联疫苗，通过二联苗和单联苗比较试验显示，二联苗与两种单苗免疫猪产生的PPV和JEV抗体水平无显著差异。以上试验均证实两种病毒抗原同时刺激机体没有相互干扰作用。
3 PPV疫苗的免疫程序 在早期的研究报告中，PPV疫苗的免疫均为间隔2～3周二次注射，随着疫苗生产工艺的改进，许多学者发现一次免疫注射也能达到良好的效果，免疫后的后备母猪在妊娠40d时用强毒攻击，可以获得完全保护。此外，Edwards等认为PPV疫苗只能用于没有母源抗体的猪，因为在田间条件下母源抗体可能在不同程度上干扰疫苗的效果。Paul等发现猪群在接种PPV灭活苗时，母源抗体水平低的猪与血清学阴性猪的免疫应答完全一样，而中等水平的母源抗体对疫苗免疫有轻微干扰作用，高效价抗体对疫苗有明显干扰作用。吕建强等进行了PPV母源抗体对灭活疫苗免疫效果影响的研究，结果证实不论母源抗体水平高低均不会明显抑制疫苗的主动免疫反应，但是具有低效价母源抗体猪的主动免疫抗体反应规律，与具有高效价母源抗体猪的主动免疫抗体反应规律不同。在母源抗体滴度大于1c 149．5时，灭活疫苗接种后抗体水平先降低然后上升，升幅只有1～3倍；而母源抗体小于1: 25．6时，主动免疫抗体持续上升，母源抗体阴性的猪抗体增幅最大。根据PPV的流行病学特点，仔猪吃奶后2～3d即可在血液中检测到母源抗体，并于8一14d达到高峰，母源抗体可持续20～24周，因此PPV疫苗的免疫接种时间应选择在20周左右。
4新型疫苗展望 尽管PPV的弱毒苗和灭活苗在猪细小病毒病的预防控制中起到了十分重要的作用，但是各种疫苗均有不同程度的缺陷和不足，如弱毒疫苗发生重组及毒力返强的潜在威胁，以及灭活疫苗免疫效果不稳定等。因此，寻找和发展更为安全有效的疫苗一直是猪细小病毒病免疫预防研究的主题。
4.1 基因工程亚单位疫苗 Martinez等将PPVVP2基因克隆到杆状病毒表达系统中，并成功地在昆虫细胞中高效表达，表达的VP2多肽能自我装配成类病毒粒子(Virus-Like Particles，VLPs)，用其免疫母猪能诱导产生免疫应答。尽管未见有关该种疫苗进一步研究和应用的报导，但是VP2基因在体外表达的蛋白能自我包装成类病毒粒子的特性，为重组多价亚单位疫苗的研究打下了基础。
4．2 基因工程多价亚单位疫苗 Sedlik等将PPVVP：和包含淋巴细胞脉络丛脑炎病毒(LCMV)的118-132位氨基酸的抗原决定簇区相连，然后克隆于杆状病毒表达载体PACYM，转染表达PPV：VP2-LCMV蛋白，利用该重组蛋白免疫鼠可以诱导强烈的CTL反应，在体内持续时间长达9个月，并可抵抗致死量的LCMV攻击。之后，Sedlik又将LCMV的CD8+T细胞抗原决定簇多肽共价结合于l／1m的脂质微球上，与上述表达的PPV：VP2-LCMV蛋白一起进行了免疫小鼠的比较，结果发现二者都能诱导产生很强的CD8+T细胞反应。但是PPV：VP2-LCMV携带的抗原量比脂质体微球少100倍时，诱导的CTL活性仍比脂质体微球诱导的CTL活性高6倍，并且只有PPV：VP2-LCMV免疫的小鼠能抵抗致死量的LCMV的攻击。Richard等用PPVVP2共价结合乙肝病毒HBSAg的抗原决定簇区多肽，然后免疫小鼠诱导产生了很强的针对插入的HBSA~决定簇的T细胞反应，并能抵抗乙肝病毒的致死性攻击。这些结果均说明PPVVP2类病毒粒子，作为一种抗原的转运载体具有很大的潜在价值，并为进行多价重组疫苗的研究创造了良好的条件。 PRV和PPV在临床上经常混合感染的现象已有报导，因此研制出．这二种病毒的重组疫苗对生产实践也具有重要意义。PRV属于疱疹病毒科。疱疹病毒亚科的猪疱疹病毒I型，该病毒基因组是双链线状的DNA，大小约为150kbp，含有多个可缺失的非必需基因，插入外源基因容量可达20kbp，易于进行基因操作，因此具有作为病毒载体的必要条件。迄今为止，国内外用PRV作基因表达载体已成功表达了10多种外源目的基因。如Zijl等最早实现了病原保护性抗原基因在伪狂犬病毒中的表达，他们将猪瘟病毒(HCV)的囊膜蛋白基因El插入到gG启动子的下游，构建了几株表达El的重组伪狂犬病毒；将这些重组病毒进行动物试验，结果接种重组病毒的猪均能产生对HCV、PRV的高滴度中和抗体，并可保护猪免受PRV、HCV的强毒攻击。国内，王家富等构建了携带猪瘟病毒E2基因的重组伪狂犬病毒。但是上述研究所用载体均为PRV弱毒株，人们对其安全性仍有担心。为些，我们实验室近年来成功地研制出PRV的TK-／8G-／LacZ+疫苗株，该毒株缺失了PRV的毒力基因(TK)，并有LacZ+标志基因作为筛选标志，以供重组筛选，因而成为更为理想的重组病毒载体。鉴于PPVVP2基因的良好免疫原性，将其插入到PRV载体中，有望研制出理想的PPV--PRV二价重组基因工程疫苗。
4．3 基因疫苗 基因免疫又称核酸免疫，是由Wolff和Feigner于1990年偶然发现的，直接将编码有目的蛋白基因和表达调控序列的DNA或RNA注射到动物机体内，利用机体的转录和翻译系统，合成目的蛋白质，刺激机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。这种能够在体内表达外源蛋白，刺激机体产生免疫应答的核酸称为核酸疫苗，包括DNA和RNA疫苗。由于基因疫苗具有易于构建和改造，规模化生产成本低廉，具有良好的热稳定性、可诱导机体产生全面的免疫应答，故被认为是继减毒、灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗，并被称作是疫苗的第三次革命。在1994年的世界卫生组织会议上，与会专家一致认为核酸疫苗将成为疾病防治中的又一个重要手段，特别是它将在一种疫苗预防多种疾病方面发挥作用。尽管对核酸疫苗进行了理论和应用方面的详细探讨，但是其作用机理目前尚未阐明。理论上认为，迄今所有用于主动免疫的第一、二代疫苗都可完善成效果更加理想的核酸疫苗。赵俊龙等进行了有关PPV核酸疫苗的研究，动物试验初步表明，以PPV结构基因VPl和VP2分别构建的核酸疫苗，均能诱导产生较高水平的体液免疫和细胞免疫，比常规灭活疫苗产生的高。核酸疫苗的生产简便、成本低廉，也预示着其具有理想的应用前景。
4．4 转基因植物可饲(食)疫苗 转基因植物可饲(食)疫苗是在二十世纪八十年代，利用植物基因工程技术创造转基因植物的基础上发展起来的。首先进行转基因植物可饲疫苗研究的是Curtiss和Cardineau，他们以专利的形式发表了他们的第一篇报告。Mason等报道了在转基因植物中表达乙肝表面抗原，提出转基因植物疫苗的概念，他们在研究HBSAg在转基因植物中表达时，发现外源基因在转基因植物中的转录和翻译没有受到限制，不仅可以正常编码蛋白，而且可以组装形成类病毒颗粒。正是基于这一点，我们认为有望开发出PPV转基因植物可饲疫苗，因为PPV的VP：基因表达后能自我形成类病毒粒子，这对保持其免疫原性是非常重要的；另外，VP2基因表达的类病毒粒子可以作为其它抗原的转运载体，这为开发多价的转基因植物疫苗提供了条件。
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猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)研究进展
猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床特征的高度接触性传染病。TGE首次由Doyle和Hutchingsl946年在美国报道，日本(1956年)和英国(1957年)先后报道该病，这之后欧洲、北美、亚洲等多个国家相继报道发生了TGE，现已成为一种世界性猪的疾病。我国从60年代起就有TGE的报道，近些年来有进一步流行的趋势，尤其是冬季和早春寒冷季节常呈地方性暴发流行，给养猪业造成极大危害。在1984年和1986年间，欧洲北美等地又报道了一种特别的TGEV自然缺失变异株-猪呼吸道冠状病毒(porcine respiratory coronavirus，PRCV)，我国目前仍未见有该病毒的报道。TGEV仍是现今引起仔猪发病和死亡的主要原因之一。1992年美国猪场TGE血清阳性率为36％，大多欧洲国家猪场阳性率几乎为100％(这其中有很大部分是由PRCV引起)，我国台湾地区1993年仔猪TGE的阳性率高达65％。本文就TGEV研究进展作一综述。
1 形态学特征
TGEV属于冠状病毒属，是一种多形性有囊膜的病毒。病毒粒子呈圆形或椭圆形，直径约为90-160 nm，外膜上覆有花瓣状纤突，纤突长(约18～24 nm)而稀疏，末端呈球状，直径10nm左右。某些病毒粒子在以磷钨酸负染后，可见到一个电子透明中心或没有特征的核心，其内部具有一个呈串珠样的丝状物。
2 理化学特性
TGEV在冻存状态下很稳定，肠组织内病毒在-20℃ 下保存6～18个月滴度无明显下降，但病毒不耐热，加热65℃ 10 min或56C45 min即全部灭活。粪尿中病毒粒子在5℃下存放8周、20℃下2周和35 ℃下24h仍具有感染性。病毒在光、紫外线照射下迅速灭活，对乙醚、氯仿和去氧胆酸钠敏感，而在胆汁中相当稳定。用0．05％甲醛溶液37℃处理20 min即能使病毒灭活。TGEV在pH4～8时稳定，对胰酶有抵抗力，能耐0．5％胰蛋白酶1 h，但强、弱毒株对胰酶和蛋白分解酶的敏感性不同，毒株的毒力越弱，其对胰酶的敏感性越高。TGEV的这些特性有利于自身抵抗胃肠的酸碱环境。至今仍未阐明各种化学、物理的处理对TGEV敏感性、毒力影响的直接关系。
3 生物学特性
TGEV和PRCV野毒株对细胞培养的适应情况不一，较敏感的细胞是猪甲状腺细胞、唾液腺细胞、猪睾丸细胞和胎猪肾细胞，此外也可用食管、小肠组织块等分离病毒。近年来，ST、PKl5细胞系成为实验室培养TEGV和PRCV易感并方便的细胞培养基。TGEV感染细胞后4～5 h，就可在细胞中用免疫荧光试验检测到病毒抗原，病毒通过内质网的出芽形式成熟，成熟病毒从感染细胞逸出被覆在宿主细胞膜表面。TGEV主要侵染小肠绒毛上皮细胞并增殖，引起绒毛显著萎缩，导致病猪发生严重腹泻。PRCV主要侵染呼吸道上皮细胞和肺组织，在小肠上皮细胞中只能零星局部感染，不引起腹泻，不产生或仅产生轻微的呼吸道症状，但感染了PRCV的猪如继发感染了细菌或其他病毒则会引起呼吸道疾病，甚至引起病猪突然死亡。
4 基因组成、结构与功能
TGEV与PRCV含有一大的聚腺苷酸化的单链正股RNA基因组，病毒基因组的复制和表达与其他冠状病毒相似。TGEV的基因组全长约28～30kb左右，分子量为9X106KDa，在其5'端有一帽结构。3'端有一共价结合的PolyA结构。TGEV的5'端约20 kb的序列编码RNA依赖的RNA聚合酶，在3'端约8．4 kb序列含8个开放读码框架(ORF)，编码亚墓因组RNA表达的全部mRNA基因组。所有mRNA都具有相同的3'polyA末端，5'末端则长短不一。除了mRNA8之外，所有mRNA都是多顺反子结构，但只有在5'末端的单一序列才具有编码功能。
4．1 POL 酶
冠状病毒的5'端不翻译区域被认为是编码RNA依赖的RNA聚合酶。在TGEVPurdue-115株的5'端约20 kb的序列中含有2个大的开放读码框架ORFla和ORFlb，分别含有4 017和2 698个密码子。在ORFla的上游有一个长3个密码子的小ORF，冠状病毒属的传染性支气管炎病毒(IBV)和人冠状病毒HCV229E的同源小ORF则分别长8个和11个密码子。在TGEV的ORFla和ORFlb各自翻译产物中均含有一个核糖体移码激活区。TGEVORFla的氨基端较羧基端表现出更大的序列差异性，TGEVORFlb较保守。
4．2 mRNA基因组
TGEV进入感染细胞后，由先导RNA引物起始转录合成，正链RNA先转录出一条负链RNA。先导RNA序列从负链模板上独立转录下来，然后与负链模板上各基因起始处的同源亚基因序列配对，引导mRNA的合成。mRNA的合成是不连续的，尚未合成完毕的mRNA可从模板上脱落下来形成游离的mRNA中间体，这些中间体又可重新接合到模板上继续合成。TGEV整个先导序列长约90个核苷酸。在大多mRNAORF的上游存在先导RNA引物识别序列ACTAAAC，但mRNA4的识别序列为CTAAAC，缺少一个A，这被认为是导致mRNA4较小的原因。
4．2．1 S基因
TGEV S基因编码的S蛋白全长为1 447-1 449个氨基酸左右，内含有32～34个N-联糖基化位点。S蛋白的N-联糖基化位点的变异主要集中在氨基端区域。S蛋白的4个主要抗原位点(A、B、C、D)也存在于氨基端区域。A位点主要诱导中和抗体的产生，可分成Aa、Ab、Ac 3部分，核心分别存在于538、591和543等3个残基处，A位点在S蛋白中保守存在。其他3个位点，B存在于97-144残基区，C位点存在于49-52残基区，D位点存在于382-385残基区，B、C、D三位点均不保守。A、B两位点是依赖于S蛋白的糖基化作用和正确折叠构型产生的，而C、D两位点的这种依赖性则很小。比较PRCV的基因组发现，在等位于TGEV的S基因起始密码子下游59核苷酸处，存在672个核苷酸的缺失(不同PRCV株缺失数目差异较大)，编码21-245氨基酸残基缺失，不存在'B、C、D 3个抗原位点。PRCV在S基因处的缺失机制仍不清楚，但聚合酶作用下的RNA重组可能是原因之一，有人推测TGEV疫苗免疫的压力也起了重要作用。
4．2．2 mRNA3 TGEV的mRNA3含2个ORF：ORF3a和ORF3b，分别编码2个非结构蛋白。内含有N-联糖基化位点。ORF3a区的点突变、缺失和插入造成了TGEV不同毒株在此区的变异较大，ORF3b较保守。mRNA3区域与TGEV的病原性或毒力强弱密切相关。比较TGEV和PRCV的mRNA3，发现等位于TGEV ORF3a的起始密码子处，PRCV缺失了22个碱基，在ORF3a的225碱基处，PRCV缺失了13个碱基，没有ACTA序列，从而先导RNA引物识别序列ACTAAAC缺失，导致PRCV在ORF3a区缺失。在等位于TGEV ORF3b处，TGEV的3个T被PRCV的2个A和一个C替换，PRCV在此形成了一个新的先导RNA引物认识序列AACTAAAC，从而使得PRCV在mRNA3亚基因处出现一个ORF。TGEV还有一种小蚀斑(SP)表型改变变异株，其S基因与野毒型TGEV S基因相似，但SP病毒S基因下游却出现一大的缺失(462个碱基)，这一缺失导致一潜在病毒编码蛋白的ORF丧失，并使第二个潜在病毒蛋白的N端部分丧失。这两个ORFs在高代次细胞传代的Nouzilly株(一种SP表型的二次致弱TGEV毒株)也不存在。因此有人认为SP病毒、Nouzilly株和PRCV株的病原性或毒力改变与这些基因缺失和替换有关。
4．2．3 ORF4、M、N、ORF7 TGEV的这些区域高度保守，未发现PRCV同TGEV有很大差异，同源性高达98％。ORF4编码82个氨基酸长的膜相关蛋白(sM)，此区域不是病毒增殖的必需区，它的表达可能与病毒粒子的病原性或毒力有关。ORF7编码78个氨基酸。
5 主要结构蛋白及功能
5．1 S蛋白(纤突蛋白) 该蛋白位于病毒的最外面，构成病毒的纤突，分子量200 KDa左右。S蛋白氨基端是TGEV识别靶细胞、诱导产生中和抗体和决定病毒组织嗜性的密切相关区。其中219残基区与病毒粒子对肠道的组织嗜性至关重要。不同毒株氨基端变异较大。S蛋白羧基端构成纤突的柄及跨膜区，高度保守。在TGEVS蛋白的N端区域存在一血凝活性区，用唾液酸酶处理TGEV可激发血凝活性，但此区域在PRCV S蛋白中缺失，因此检测血凝活性的存在与否是一种区分PRCV和TGEV的方法。
5．2 M蛋白(膜蛋白) M蛋白长约262个氨基酸，分子量28-31KDa。M蛋白的羧基端暴露在病毒粒子的表面，是病毒的免疫显性区，针对此区域的抗体可以中和TGEV和介导TGEV感染的细胞发生补体溶解反应。M蛋白氨基端6-22残基区存在一干扰素基因决定簇，可在体内外诱导。-干扰素的产生。
5．3 N蛋白(核蛋白) 是病毒粒子内部的一种蛋白，由382个氨基酸组成，分子量47KDa，主要构成病毒的核蛋白。N蛋白具有3个抗原区域(A、B、C)，这3个抗原区域在TGEV分离株中均高度保守，但PRCV在B区域与TGEV有差异。N蛋白含有蛋白水解位点，通过蛋白水解作用和去磷酸化作用，对病毒粒子的装配起重要影响。
6 与相关冠状病毒抗原性、基因组之间关系 通过血清学方法可将冠状病毒分为3个抗原组，其中TGEV与PRCV、犬冠状病毒(CCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猫肠道冠状病毒(FECV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、人冠状病毒(HCV229E)的抗原性之间存在相关性。TGEV和相关冠状病毒均含有3种基因相似结构蛋白：S蛋白、N蛋白和M蛋白。此外，TEGV坯含有另一种结构蛋白sM，而其他一些冠状病毒则含有另一种结构蛋白HE(gp65)，gp65通过二硫键形成二聚体，这种二聚体在S蛋白纤突下形成第2个冠，gp65具有血凝活性。冠状病毒S蛋白是否可裂解成两部分是冠状病毒分类的另一特征。TGEV和相关冠状病毒(PRCV、CCV、FECV、FIPV)的S蛋白不能分裂，而火鸡冠状病毒(TCV)、HCV、OC43、BCV、MHV、IBV及HEV等在纤突蛋白上存在一蛋白分裂位点，可使S蛋白分裂为S1和S2两种蛋白。而根据核酸序列数据可将TGEV、PRCV、CCV、FIPV、FECV、PEDV和HCV229E分为一组。
7 免疫原性 S蛋白是TGEV的主要抗原蛋白，其受体是B细胞，可介导引起体液免疫应答。TGEV还是一种细胞依赖性的病毒抗原，T细胞可对整个病毒粒子产生应答反应，引起细胞免疫应答。PRCV与TGEV的病原性，组织嗜性不同，但抗原关系密切。用PRCV制成的活苗免疫孕母猪可引起较高水平的IgG，但IgA和IgM的水平不高。有人认为这是因为PRCV主要在呼吸道组织中增殖，而呼吸道的淋巴小结较肠道内淋巴小结少很多，故抗原刺激呼吸道产生的淋巴母细胞少，从而使得局部产生的IgA少。看来，PRCV可提供抗TGEV的部分保护力。
8 病原性
8．1 组织嗜性和宿主细胞 TGEV主要是一种肠道病原体，但也可以在呼吸道中增殖。对TGEV分离株进行连续细胞传代可使病毒丧失对肠道的组织嗜性，但仍对呼吸道组织和肺泡巨噬细胞保持嗜性。高度致弱的TGEV可在上呼吸道中增殖，包括扁桃体和肺，但不能在新生仔猪肠道中增殖。尽管TGEV通常引起急性肠道疾病，但也可持续感染，此时从肠道中一般检测不到病毒，相反能从感染后100天的康复猪的呼吸道中检测到病毒。
8．2 病毒受体 TGEV的受体是细胞表面的氨肽酶N(pAPN)和200 KDa的蛋白分子。小肠上皮细胞、成纤维细胞刷状缘和肺等均可表达丰富的pAPN，小肠分泌的pAPN对多肽的消化起重要作用。3日龄以内的仔猪绒毛上覆盖着上皮细胞分泌的pAPN，而另一受体200 KDa的蛋白分子在微绒毛的顶端大量存在，在绒毛上皮细胞中则含量很少，这被认为是TGEV对新生仔猪敏感的原因之一。初乳、乳汁内的因子可以影响200KDa的蛋白分子或pAPN的表达，同时可干扰病毒与受体的结合，这是喂初乳的仔猪比不喂初乳的仔猪更易耐受TGEV的感染，感染率和死亡率下降的原因。
8．3 年龄因素 TGEV病原性与感染猪的年龄关系密切相关，病毒感染成年猪的剂量比感染新生仔猪剂量要高10(4)倍。
8．4 传播宿主 育肥猪和哺乳母猪是TGEV的重要传染源，可通过污染了的粪便、哺乳母猪的乳汁、饲料以及工作人员的鞋子、衣物等传染给仔猪。此外，猫、狗、狐、苍蝇、鸟也可能是TGEV的传染源。
8．5 腹泻的发生机制 经口或鼻感染的病毒，经吞咽到达猪的小肠后，在肠绒毛上皮细胞上增殖，从而造成黏膜物理性屏障和酶活性降低，出现电解质失衡和营养成分的分解吸收异常，导致肠管内的渗透压增高，进而出现脱水和腹泻；特别是损害小肠黏膜上皮，导致产生乳糖酶等酶类的机能受阻，妨碍了糖类的分解吸收；另外由于小肠绒毛萎缩，使肠隐窝细胞代偿性增生，分泌作用增强，以及肠管内的异常发酵等，这些都是造成腹泻和病情恶化的原因。
高锌对断乳仔猪促生长作用及其机理的研究进展
近几年来国内外对高剂量锌在断乳仔猪饲粮中的添加效果进行了广泛的研究。据报道，早期断乳仔猪饲粮中添加高锌能减少仔猪下痢，提高日增重，改善饲料报酬。目前国内部分早期断乳仔猪饲料中已开始添加高锌。本文仅就国内外高锌对断乳仔猪促生长作用及其机理的研究加以综述，供进一步应用参考。
1 作用效果
丹麦科学家Poulsen(1989)最先发现，饲粮中含锌量2500mg／kg(氧化锌)可降低断乳仔猪腹泻的发病率。最近美国10所大学合作试验研究表明，以氧化锌形态添加药理效应水平(3000mg／kg锌)提高仔猪日增重13％，饲料采食量8％，饲料效率4％(Hill等，2000)。此效应对早期断奶(14天)和传统断奶(21天)仔猪同样有效，并且饲喂药理效应水平锌应在断奶后持续2周(Carlson等，1999)。 作者统计了前人33次以氧化锌形态添加高水平锌对仔猪促生长作用的试验，其中27次试验结果表明添加2000～4000mg／kg锌对断乳仔猪有促生长作用，6次试验表明断乳仔猪饲粮添加3000mg／kg锌没有促生长作用(Miller，1992；Tokach等，1992；张镇福，1998)。Schell(1994，1996)分别以氧化锌、赖氨酸锌、蛋氨酸锌或硫酸锌作为锌源，在断奶仔猪饲粮中添加1000、2000或3000mg／kg的锌，两周结果表明添加1000、2000或3000mg／kg锌均无促生长作用。这些彼此矛盾的试验结果表明需要进一步验证高锌对断乳仔猪的影响，并弄清影响高锌效果的各种因素。
2 影响高锌效果的因素
2．1 锌源、添加M量和添加时期 鉴于添加高锌对环境污染的影响，实际生产中一般用氧化锌按含锌量为2000--3000mg／kg的剂量在断乳后两周内添加，添加时间不宜超过3周。目前的大多数研究报道认为，仅氧化锌来源的高锌具有防腹泻和促生长作用(Hahn和Barker，1993)，而同时报道各种锌源中氧化锌的生物利用率最低。氧化锌中的锌大部分从粪中排出未被利用(Hoover等，1997)。对于这种矛盾现象的解释可能是因为氧化锌本身具有弱抗菌和收敛作用，以及由于氧化锌的生物利用率低于其它锌源，较高剂量的氧化锌也不会使动物发生不良反应。 为了减少高锌在畜产品中的残留和对环境的污染，动物营养学家们正努力尝试以低剂量的有机锌替代高剂量无机锌取得相同或更好的促生长效果。有试验表明添加酪蛋白锌(200mg／kg锌)的促生长效果相当于氧化锌(3000mg／kg锌)(赵国芬，1998)。Hoover(1997)的结果表明，以氨基酸复合物的形式添加有机锌(250mg／kg锌)可促进断乳仔猪的生长性能。但Hahn和Baker(1993)的试验结果只是以氧化锌形式添加3000mg／kg锌可提高断乳仔猪的平均日增重，其它锌源(硫酸锌、赖氨酸锌和蛋氨酸锌)则无效。郑家茂(2000)的试验表明，氧化锌(3000mg／kg锌)的促生长效果显著好于硫酸锌(3000mg／kg锌)。Hahn和Baker(1993)发现以饲料级氧化锌提供3000mg／kg和5000mg／kg锌均可提高仔猪的日增重和日采食量， 而硫酸锌只在3000mg／kg锌水平才提高这些生长性能指标，5000mg／kg锌无效，但添加硫酸锌的血浆锌浓度是添加氧化锌的两倍。某些研究者认为，由于氧化锌生物利用率较低使猪对多余氧化锌较其它锌源如硫酸锌有更强的耐受性(Wedekind和Baker， 1990；Wedekind等，1992；Wedekind和Lewis，1993)。目前对于不同锌源仅做了一些生长性能比较试验，因为有机锌和无机锌的吸收机制可能不同，其进入体内的代谢途径也未必完全相同，所以很有必要对不同无机及有机锌源的作用模式进行系统、深入的探索，为在生产中应用高性能的锌源提供理论依据。 Smith(1997)认为添加3000mg／kg锌(氧化锌)4周可有效提高12日龄断乳仔猪生长性能， 以4000mg／kg剂量在断奶后2周饲喂可提高日增重。Carlson等(1999)认为早期或传统断乳仔猪断奶后2周补饲3000mg／kg锌(氧化锌)获得的日增重与整个28天哺乳期补饲的结果相同，仅在断乳后1周饲喂无促生长作用。Smith等(1996)发现在断奶后3周饲喂3000mg／kg锌可以在不影响血细胞比容或血红蛋白浓度的情况下提高生长性能。Cox等(1997)的试验结果是补饲4000mg／kg锌(氧化锌)仔猪平均日增重降低。Smith(1995)认为，分两阶段饲养即断乳后两周补饲4000mg／kg锌，第3、4周补饲2000mg／kg锌促生长效果最佳。Muihead(1992)也认为，所用锌的化学形式和饲喂时间是影响试验结果的关键。Wedekind等(1992，1994)认为猪和鸡的贮存机理不同，需进一步研究确切的锌贮存机理。生产中多以氧化锌添加3000mg／kg，饲喂2周为宜。 由于锌能迅速从体内排除，因此锌在组织内不会积累。荷兰IPVS(1992)的研究表明，即使每吨猪饲料中添加4kg氧化锌，肝脏中锌累积含量与对照组相比完全没有差异。因此，在短时期(3周内)添加氧化锌几乎没有毒性危险。Brink(1959)的研究发现，饲喂2000-8000mg／kg碳酸锌后仔猪出现中毒症状。Jensen- waern(1998)的试验表明， 以2500mg／kg锌(氧化锌)添加4周可能对肝脏有中毒影响，肝细胞质内出现空泡，脂肪沉积增多。而许梓荣(2001)报道，短期(30天)内添加高剂量3000mg／kg锌(氧化锌)不会对肝脏产生功能上的损伤。
2．2 饲料营养水平和环境因素 早期断奶仔猪饲粮中添加高锌的效果受饲粮营养水平和环境条件的影响。在一个良好的生长环境下，在以营养丰富的乳清粉、喷雾干燥血粉和进口鱼粉为原料的配合饲粮中添加3000mg／kg的锌(氧化锌)比无环境控制条件下玉米-豆粕型饲粮中添加3000mg／kg的锌(氧化锌)效果要好(LeMieux等，1995)。但Lee等(1996)报道，在组成较复杂的饲粮(包括乳清粉、喷雾干燥血粉和鱼粉等)中添加3000mg／kg的锌(氧化锌)和在简单的玉米-豆粕型饲粮中添加锌一样对断奶仔猪有效。张英东(1998)建议添加高锌，以饲粮粗蛋白质水平高于20％，赖氨酸1．1％-1．5％为宜，并要控制好仔猪的生长环境。 2．3其它微量元素 饲粮中添加超过正常需要量20-30倍的高水平锌，有可能打破原有各种元素之间的平衡。因此在添加高锌的同时，要考虑与其它元素的平衡，主要考虑的是铜、铁、钙等，但深入研究高锌下这些元素用量的报道却很少。 Smith等(1997)、Hill等(1996)报道，高锌和高铜(250mg／kg)混合添加对仔猪生产性能的提高不具有可加性。Hill等(1996)在混合添加高锌(3000mg／kg)和高铜(250mg／kg)时，尽管血清锌和铜的浓度都升高，但不改变血清铁的浓度。Jensen-waern(1998)给仔猪补饲2500mg／kg锌(氧化锌)，肝脏、肾脏、骨骼肌中钙、铜、铁、镁和锰的浓度未见降低。对高锌条件下仔猪达到最优生产性能时，其它元素的用量和比例还有待于进一步研究。
3 作用机理
3．1 对采食量的影响 锌是味觉素(一种含两个锌离子的唾液蛋白)的组成成分，味觉素对口腔粘膜上皮细胞的结构、功能、代谢有重要作用，进而影响舌乳头中味蕾小孔的形态和功能，因此添加锌可增强味蕾对味觉的敏感性，产生促进采食的效果。Hahn等(1993)报道，在早期断奶仔猪饲粮中添加高锌，大约在1．5mg／L血浆锌水平刺激仔猪的随意采食量，并且认为生长性能的提高直接得益于采食量的增加。郑家茂(2000)、LeMieux(1994，1995)和Hoover(1997)也认为高剂量无机锌的作用与仔猪的采食量密切相关，增加采食量而使生长加快，可能是由于猪具有正常过剩的消化能力，也可能是由于增加采食量能提高消化吸收能力，或二者兼而有之。仔猪刚断奶时的主动采食量一般都很低，无规律，并且变化不定。仔猪断奶后的采食量同绒毛高度和隐窝深度呈正相关。这表明采食对胃肠道的成熟有促进作用(Kelley，1991)。因此仔猪的采食量在促进消化系统发育上有重要作用。仔猪断奶后采食量大，会使其消化系统适应于新的饲喂系统和饲料成分，因而高锌对仔猪有促生长作用。 Ward(1996)的试验发现添加锌(氧化锌、蛋氨酸锌)虽然不影响平均日采食量，但仔猪的增重耗料比或平均日增重仍有所提高。Carlson(1999)认为高锌的促生长作用并不完全是由于增加了采食量所致。一些研究者(Carlson等，1995；Poulsen，1995；Smith等，1997)报道，当采食量不增加或少量增加时，断乳仔猪补饲高锌2500～4000mg／kg(氧化锌形态)，生长性能提高了10％一26％。因此，锌的促生长作用很可能是包括直接效应和提高采食量的间接效应在内的系统作用机理。
3．2 对消化道结构和功能的影响 锌能改变消化道上皮细胞的结构和功能。Carlson(1998)报道补饲高剂量氧化锌能改善肠道形态，使十二指肠隐窝变深，绒毛变长，绒毛：隐窝比降低，因此他推测高锌促生长的作用机理可能与改善十二指肠形态有关。Stanger(1998)用感染传染性胃肠炎(TGE，Transmissible gastroenteritis)的断乳仔猪作试验，发现高锌可促进受病毒损害的肠道组织的恢复。 饲粮中锌水平的变化影响小肠MTmRNA的表达，高锌刺激肠黏膜细胞MT的合成，而MT可调节锌的吸收。所以有人认为(Carlson，1998)肠道MT的生成可能是高锌促进仔猪生长的作用模式之一。肠道细胞通过MT储留的锌增多可能增加蛋白质合成和细胞增殖，从而有助于改善肠道健康。 Schell和Korneay(1994)因为非肠道注射醋酸锌对生长无促进作用，认为氧化锌促生长作用似乎是通过直接作用于肠道的机理产生的。由于有试验表明醋酸锌对仔猪无促生长作用(MuCully等，1995)，所以此推论值得怀疑，但这不失为验证高锌的作用位点是否在肠道的一个新思路。
3．3 对消化酶的影响 锌能调节各种含锌消化酶的活性，影响猪的消化。饲粮中添加高剂量氧化锌使饲料干物质、粗蛋白的表观消化率分别提高4．32％和4．52％。这可能与羧肽酶A和羧肽酶B的活性上升有关，但尚需进一步研究证实(许梓荣，2001)。
3．4 对肠道微生物的影响 锌具有抑制某些肠道有害微生物生长的作用。腹泻常与病原性大肠杆菌相关，锌离子对大肠杆菌的呼吸链有抑制作用(Kasahara等，1972，1974)。这可能是高锌抗腹泻的机理之一(Fryer，1992)。Jensen(1987)发现，在琼脂培养基中添加100mg／kg锌(氧化锌形态)可使猪小肠内容物培养物的大肠杆菌总数减少，表明锌可能有杀菌作用，但随后的体内试验(添加1350mg／kg锌，氧化锌形态)未观察到类似的抑菌作用(Jensen，1987)。LeMieux等(1994)用高氧化锌(锌3000mg／kg)与抗生素(阿布拉霉素165mg／kg)对比试验，发现高锌对断奶仔猪平均日增重和平均日采食量提高显著，阿布拉霉素效果却不显著。而O'Quinn等(1997)报道，氧化锌和抗生素对隔离早期断奶(SEW)仔猪都有效。近年来，发现饲粮中添加高剂量氧化锌可使断乳仔猪肠道大肠杆菌区系多样性的降低减小(Melin等，1996)。因此，断乳时添加氧化锌导致的高生长率可能与维持稳定的大肠杆菌区系有关。Schell(1996)报道，在无腹泻的情况下添加高锌(1000、2000或3000mg／kg锌，分别以氧化锌、赖氨酸锌、蛋氨酸锌或硫酸锌作为锌源)无促生长作用，表明高锌促生长的作用模式与腹泻有关。但也有试验表明添加3000mg／kg锌(氧化锌)影响仔猪断奶后腹泻的严重程度不明显(Miller，1992)。Hahn和Baker(1993)报道，不发生腹泻的仔猪饲喂高锌也有促生长作用。所以，对高锌是否通过减少腹泻而促进生长这一问题仍存在争议。
3．5 对免疫功能的影响 通过对血液白细胞的数量和分类及IgG的检测，表明3000mg／kg锌(氧化锌)能促进仔猪的体液免疫反应。对血液中抗氧化酶(SOD、CAT和GSH-Px)的活性的测定结果表明，高锌能提高保护机体免受自由基损伤的能力(赵昕红等，1999)。Jensen-waern(1998)认为添加锌2500mg／kg(氧化锌)对断奶仔猪血液中中性粒细胞功能无影响。Smith等(1996)也报道，添加高锌并不改变血细胞总数或细胞免疫功能。另外，饲粮中添加高剂量锌可使肝脏金属硫蛋白(MT)含量显著升高，为对照组的12．4倍，肝脏中Cu-Zn-SOD活性上升了48．36％(许梓荣，2001)。金属硫蛋白可通过巯基与自由基结合，从而保护细胞免遭氧化反应中产生的超氧自由基的损伤。超氧化物歧化酶则是机体内超氧自由基的主要清除剂，二者在体内含量的升高对于维持生物膜完整、提高机体免疫能力具有非常重要的意义。但Carlson等(1997)报道，在早期断奶后1～2周饲喂高锌对细胞中铜锌超氧化酶(Cu-Zn-SOD)的活性无影响。Heugten等(1995)报道，添加有机锌复合物不能提高断奶仔猪的生长性能和免疫功能。
3．6 对促生长激素的影响 生长激素是通过刺激胰岛素样生长因子I(IGF-I)生成而发挥其生理功能的，锌可能通过影响IGF-I含量影响动物的生长。推测高剂量锌的添加，或是通过提高DNA聚合酶、RNA聚合酶活性，或是影响锌指DNA结合蛋白，或二者兼而有之，提高了IGF-I mRNA的丰度和稳定性，促进了IGF-I基因的转录和翻译。为证实这一推测，需采用cDNA探针、NorthernBlot等现代分子生物学手段作深入的探讨。仔猪饲粮中添加高剂量锌对血清中3碘甲腺原氨酸丁3、甲状腺素丁4、生长激素未产生明显影响，但胰岛素、胰岛素样生长因子I的浓度分别上升了24．74％和35．43％(许梓荣，2001)，但是由于此试验未作配对饲喂，因此无法断定这些影响是高锌的直接效应还是采食量提高的间接效应。胰岛素和IGF-I水平的升高，为高锌的促生长功效提供了有力的理论依据，另一方面也说明了这可能是一种整体性效应，而并非仅仅停留在消化道水平。
3．7 其它影响 RNA聚合酶是含锌酶，分子中含有2个Zn2+，2个Zn2+在所有的RNA聚合酶中发挥着催化功能和结构功能，RNA含量升高可能与该酶活性升高有关。另外，在哺乳动物中近年来相继发现一些含锌蛋白质如锌指(Zincfinger)可调控基因的表达。对于添加锌是否引起这些含锌蛋白变化，从而影响基因的表达，值得深入研究。 锌的促生长作用可能是系统性的，并非仅局限于肠道。锌通过锌指蛋白刺激合成代谢激素基因的表达，进而促进仔猪的生长也是可能的，但尚需从猪上获得这方面的直接试验证据。
4 高锌与环境问题
高锌的应用已引起了世界各国的广泛关注。猪粪中的锌可能导致可耕地严重的金属污染。日本政府规定可耕地干土中的锌含量应在120mg／kg以下。有人指出，不能否认锌对环境的污染问题，但决定粪便中排出的锌量不仅是开食料中的含锌量，也取决于日粮内99％的其它饲料(生长猪和肥育猪饲料)的含锌量。因此，即使对环境有污染，但仅仅指责开食饲料中加锌是不可取的(朱钦龙译，1994)。
5 有待进一步研究的问题
高剂量锌的研究和应用是当前养猪业的热点之一，但我国在这方面的研究仍停留在饲养试验水平。因此，对高剂量锌的效果和作用机理很有必要从生理生化和分子生物学水平进行深入探讨：
(1)对无机锌源和有机锌源的作用模式进行系统、深入的研究，为确定发挥断乳仔猪最大生长性能所需的添加形式和最适添加量，了解影响高锌添加效果的因素提供理论依据；
( 2)在消化生理方面，对于高锌对消化道中含锌酶的活性的影响有待于进一步探讨；
(3)通过显微镜和电镜来观察高锌对胃肠道特别是小肠形态结构的影响，以进一步研究高锌对肠道微生物菌群的影响；
(4)在分子生物学方面，深入研究高锌对关键含锌酶、关键生长调控激素及免疫有关活性物质的基因表达的调控。
(5)对于MT在高锌的作用模式中是否具有重要地位有待研究；
(6)高锌对生长调控激素受体与对应激素结合效率和控制采食的神经内分泌调节(如神经肽或其受体)是否存在影响也有待研究。受体)是否存在影响也有待研究。
猪疫苗的正确使用方法 猪常用疫苗使用过程中注意事项
近年来，我国集约化猪场不断增多，但由于养殖水平的不同，对猪场的主要疾病的免疫，有的可以达到很好的预防效果，有的却为疾病的发生提供了温床。如何科学地使用疫苗是我们迫切需要解决的问题。下面具体来介绍一下：猪疫苗的正确使用方法猪常用疫苗使用过程中注意事项。
一、疫苗的接种方法
1.皮下注射。皮下注射是目前使用最多的一种方法，大多数疫苗都是经这一途径进行免疫。皮下注射是将疫苗注入皮下组织后，经毛细血管吸收进入血液，通过血液循环到达淋巴组织，从而产生免疫反应。注射部位多在耳根皮下，皮下组织吸收比较缓慢而均匀，油类疫苗不宜皮下注射。
2.肌肉注射。肌肉注射是将疫苗注射于肌肉内，注射针头要足够长，以保证疫苗确实注入肌肉里。
3.超前免疫。是指在仔猪未吃初乳时注射疫苗，目的是避开母源抗体的干扰和使疫苗毒尽早占领病毒复制的靶位，尽可能早刺激产生基础免疫，这种方法常用在猪瘟的免疫。
4.滴鼻接种。滴鼻接种是属于黏膜免疫的一种，黏膜是病原体侵入的最大门户，有95％的感染发生在黏膜或由黏膜侵入机体，黏膜免疫接种既可刺激产生局部免疫，又可建立针对相应抗原的共同黏膜免疫系统工程；黏膜免疫系统能对黏膜表面不时吸入或食入的大量种类繁杂的抗原进行准确的识别并作出反应，对有害抗原或病原体产生高效体液免疫反应和细胞免疫反应。目前使用比较广泛的是猪伪狂犬病基因缺失疫苗的滴鼻接种。
5.口服接种。由于消化道温度和酸碱度都对疫苗的效果有很大的影响，因而这种方法目前很少使用。
6.气管内注射和肺内注射。这两种方法多用在猪喘气病的预防接种。
7.穴位注射。在注射有关预防腹泻的疫苗时多采用后海穴注射，能诱导较好免疫反应。
二、各类疫苗特点
1.冷冻真空干燥疫苗。大多数的活疫苗都采用冷冻真空干燥的方式冻干保存，可延长疫苗的保存时间，保持疫苗的效价。病毒性冻干疫苗常在－15℃以下保存，保存期一般为2年。细菌性冻干疫苗在－15℃保存时，保存期一般为2年；2-8℃保存时，保存期9个月。
2.油佐剂灭活疫苗。这类疫苗为灭活疫苗，以白油为佐剂乳化而成，大多数病毒性灭活疫苗采用这种方式。油佐剂疫苗注入肌肉后，疫苗中的抗原物质缓慢释放，从而延长疫苗的作用时间。这类疫苗2-8℃保存，禁止冻结。
3.铝胶佐剂疫苗。以铝胶按一定比例混合而成，大多数细菌性灭活疫苗采用这种方式，疫苗作用时间比油佐剂疫苗快。2-8℃保存，不宜冻结。
4.蜂胶佐剂灭活疫苗。以提纯的蜂胶为佐剂制成的灭活疫苗，蜂胶具有增强免疫的作用，可增加免疫的效果，减轻注苗反应。这类灭活疫苗作用时间比较快，但制苗工艺要求高，需高浓缩抗原配制。2-8℃保存，不宜冻结，用前充分摇匀。
三、常用疫苗的免疫接种
1.猪瘟。猪瘟一直是困扰着养猪业的一大问题。本病以散发和非典型症状为主，10-20日龄和40-60日龄的仔猪易感，造成猪瘟发生的原因主要有：疫源的广泛存在，猪的隐性带毒，疫苗选择、运输和保存不当，免疫程序不当。因此，进行有效的猪瘟疫苗的免疫是预防猪瘟最好的方法。
根据近几年的临床实践和一些专家的研究结果，针对目前普遍使用的猪瘟兔化弱毒疫苗推荐几种免疫程序。
（1）猪瘟洁净区。
种公、母猪：每年春、秋各免疫一次，3头份/头。
后备种公、母猪：选定后配种前免疫一次，3头份/头。
仔猪：20-25日龄首免，60-65日龄二免，各2头份/头。
（2）猪瘟污染区。
种公猪：每年春、秋各免疫一次，3头份/头。
后备种公、母猪：选定后配种前免疫一次，3头份/头。
经产母猪：产后20天和产前30天各免疫一次，3头份/头。
仔猪：新生仔猪超前免疫（零时免疫），即出生后接种1头份/头，隔1-2小时后才可让其吃初乳，35-40日龄二免，2头份/头。
（3）猪瘟暴发区。
在受猪瘟威胁地区和猪瘟暴发区，采用紧急接种猪瘟疫苗的措施，可有效地控制猪瘟的蔓延。在发生猪瘟的猪场对除哺乳仔猪外的所有猪只紧急接种，5-8头份/头，虽在注苗后3-5天可能会出现部分猪只死亡，但7-10后猪瘟可平息。对已确诊的病猪采取扑杀的方法，如有条件在疫情控制后进行普查，淘汰隐性带毒猪，控制传染源。
2.猪伪狂犬病。猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起的一种急性传染病，给养殖业造成了巨大的损失。发病的主要原因是养猪场（户）选购疫苗时只注意价格而不注重质量，或盲目迷信多基因缺失苗的优点，造成免疫后达不到有效的保护而导致非典型性发病。
对集约化猪场猪伪狂犬病的免疫程序，目前国内外的许多专家都做了研究。据资料介绍，猪伪狂犬病的母源抗体在14-16周龄消失，9-10周龄时达到保护临界值。猪伪狂犬病gE基因缺失苗经过多年的应用，证明是安全有效的，通过滴鼻接种不会产生副作用。针对目前普遍使用的猪伪狂犬病gE基因缺失疫苗，推荐几种免疫程序。
（1）猪伪狂犬病洁净区。
种公、母猪：每年免疫3-4次，2头份/头。
后备种公、母猪：选定后配种前免疫1次，2头份/头。
仔猪：仔猪断奶前免疫1次，1头份/头。
（2）猪伪狂犬病污染区。
种公猪：每年免疫3-4次，2头份/头。
后备种公、母猪：选定后配种前免疫1次，2头份/头。
经产母猪：产后20天和产前30天各免疫一次，2头份/头。
仔猪：新生仔猪滴鼻，0.5头份/头，35-40日龄二免，1头份/头。
3.猪链球菌病。链球菌的种类很多，对猪致病的一般为C、D、E、L、R、S、T等群，我国主要以C群为主，D、E、R群也占了一定的比例。目前较多使用的猪败血性链球菌病活疫苗（ST171株）对预防C群猪链球菌病有很好的效果，而对一些血清型流行比较复杂的地区可考虑使用猪链球菌多价灭活疫苗。猪败血性链球菌病活疫苗一般在仔猪断奶前使用，严格按说明书用量使用，不宜加大用量。猪链球菌多价灭活疫苗可根据疾病的流行情况确定是否免疫和免疫的时间。
4.日本乙型脑炎。日本乙型脑炎又称流行性乙型脑炎，是由日本乙型脑炎病毒所致的一种人畜共患病，主要引起母猪的繁殖障碍和公猪睾丸炎。后备种猪在配种前1个月接种2次，间隔15天；疫区和受威胁地区的种猪可在每年流行季节前1个月（一般在3-4月）接种1次。
5.猪细小病毒病。猪细小病毒病只能使猪发病，主要是母猪出现繁殖障碍综合征。后备种猪在配种前1个月接种2次，间隔15天；以后种猪每年接种1次。
6.仔猪大肠杆菌性腹泻。仔猪黄痢、仔猪白痢和断奶仔猪腹泻均由仔猪大肠杆菌引起。目前常用的疫苗有仔猪大肠杆菌基因工程四价灭活疫苗、仔猪大肠杆菌基因工程三价灭活疫苗、仔猪大肠杆菌基因工程二价灭活疫苗、仔猪大肠杆菌遗传工程双价疫苗等。通常在母猪产前4周免疫1次，也可在母猪产前5-6周和2-3周各免疫1次，以保证初乳中有较高浓度的母源抗体。
7.病毒性腹泻。引起猪腹泻的病毒主要有猪传染性胃肠炎（TGE）、猪流行性腹泻（PED）和轮状病毒（RV）。常用的疫苗有猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻二联灭活疫苗、猪传染性胃肠炎和轮状病毒二联弱毒疫苗等。通常在母猪产前4周免疫1次。
8.猪肺疫。猪肺疫是由多杀性巴氏杆菌引起的一种传染病，目前国内流行的以A型和B型为主，有些地区也有D型出现，近年从有呼吸道症状或病变的病例分离出A菌的比例增加，免疫时要根据疾病的流行情况选择使用疫苗。常用的疫苗有猪多杀性巴氏杆菌病活疫苗、猪多杀性巴氏杆菌病A型（群）活疫苗和猪多杀性巴氏杆菌二价活疫苗。
9.常用的疫苗还有猪喘气病、猪萎缩性鼻炎、仔猪副伤寒、猪衣原体疫苗等，猪场可以根据自己的需要有选择性地使用。
四、使用疫苗的注意事项
1.根据养猪场的实际情况，选择可靠和适合自己猪场的疫苗及相应的血清型。上面介绍的免疫程序是一般原则，仅作为参考，必须根据实际防疫效果适当修正。
2.注意疫苗质量问题，超温保存失效疫苗和过期疫苗、失真空疫苗不能使用，疫苗自稀释后15℃以下4小时、15-25℃2小时、25℃以上1小时内用完。
3.注射时注意用具的消毒，防止交叉感染。有条件的养猪场实施免疫时，应尽量避免一个针头多次使用。
4.每头猪注射疫苗时要到位，不能少注漏注。滴鼻接种时操作一定要细心，疫苗稀释时准确掌握稀释液用量，增加滴鼻后疫苗停留时间。
5.防止其他药物对疫苗接种的干扰和疫苗之间的相互干扰，在注射病毒性疫苗的前后3天严禁使用抗病毒药物，2种病毒性活疫苗的使用要间隔7-10天，减少相互干扰。病毒性活疫苗和灭活疫苗可同时分开使用。注射活菌疫苗前后5天严禁使用抗生素，2种细菌性活疫苗可同时使用。抗生素对细菌性灭活疫苗没有影响。
6.稀释疫苗时一定要按照疫苗使用说明的要求选用稀释液。
7.不能随便加大疫苗的用量，确需加大时要在兽医指导下进行。细菌性活疫苗，如猪肺疫活疫苗、链球菌活疫苗、猪丹毒活疫苗等虽然是弱毒疫苗，按规定剂量使用是安全的，但毕竟还是有部分毒力，在使用时应严格按说明书上的剂量使用。
8.个别猪只因个体差异，在注射油佐剂疫苗、需要牛血清培养的疫苗（如猪瘟疫苗）时，如注射疫苗后半小时左右开始出现呼吸急促、全身潮红或苍白等可疑过敏症状，一般要用肾上腺素、地塞米松等解救。
1.把握疫苗使用时间
季节性是猪传染病流行的显著特点，想要有效预防该类传染病，准确把握猪用疫苗使用时间至关重要。以猪流行性乙型脑炎为例，该病由脑炎病毒引起。一旦染上该类传染病，会造成怀孕母猪流产或者产出死胎，而公猪会患上睾丸炎。就该传染病来说，蚊子叮咬是重要的传播途径，而病毒会在蚊子体内不断繁殖，然后经虫卵传播，成为第二年感染猪的重要传染源。为了更好地预防该类传染病，需要在大量蚊虫活动之前的1～2月，给猪进行乙型脑炎疫苗接种，进一步提高预防效果，避免成批猪只染上该类传染病。
2.严把疫苗质量，疫苗操作要规范
在检查猪用疫苗质量的时候，要仔细核对疫苗名称、有效期等，并检查猪用疫苗是否会因高温、低温等情况而失效，避免疫苗接种失败。还要严格按照不同类型疫苗的储存要求，仔细核对储存条件是否和说明书上要求的吻合，禁止使用那些没有批号、外观不正常、瓶塞松动等情况的疫苗，使用这类疫苗会引起安全隐患，影响猪的身体健康。在对猪进行疫苗接种的当天不能对猪舍进行消毒，也不能给猪服用抗菌类、抗病毒类药物。如果发现猪有生病症状，要及时确诊，生病期间不能给猪注射疫苗。在注射疫苗的时候，一定要按照相关要求进行消毒，逐头更换针头，同一注射器只能注射一种疫苗，不能把注射器吸出的疫苗重新注回瓶中。疫苗稀释后，要放置在阴凉的地方，并在两小时内用完，结合猪的情况，把握好疫苗用量。注射疫苗时要保持猪舍干净、通风。
猪圆环病毒病与副猪嗜血杆菌病混合感染的诊治
猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型引起的一种传染病，临床上主要表现为仔猪断乳多系统衰竭综合征和皮炎一肾炎综合征。该病能破坏猪只免疫系统引起免疫抑制，为并发或继发其他病原感染敞开门户，常见的是继发副猪嗜血杆菌病。2010年8月中旬．西柯镇某自繁自养猪场饲养的195头保育猪在转栏后出现一种以衰竭、呼吸困难、关节肿大为特征的传染病。根据其发病情况、临床症状、病理剖检变化以及实验室化验结果。确诊为猪圆环病毒病与副猪嗜血杆菌病混合感染，现报道如下。
1 发病情况
该猪场饲养母猪56头、哺乳仔猪98头、保育猪 195头、中大猪171头。其中保育猪转栏(8月7日) 2～3 d后陆续出现一些消瘦、喘气的猪，采用青霉素、链霉素、泰乐菌素、卡那霉素、磺胺类药物等进行治疗，效果均不理想。截至8月16日，累计56头猪发病，发病率达28．7％，死亡l2头。除保育猪外，母猪、哺乳仔猪以及中大猪均未见发病。经过调查，该猪场保育猪除了免疫猪瘟、口蹄疫、高致病性猪蓝耳病疫苗外，未免疫其他种类的疫苗。
2 临床症状
大部分患猪表现为精神沉郁、喜卧，体温升高到 4l～42℃ ，食欲减少或废绝，粪干，极少数病例有腹泻症状，呼吸困难，并有不同程度的咳嗽症状。患猪被毛粗乱，消瘦．耳和腹下皮肤可见许多蓝紫色出血点，关节肿大，行动蹒跚，个别患猪身上皮肤有一些红色或黑色的小痘点突出皮肤，个别严重患猪的臀部和耳部等皮肤还有出血斑。
3 病理剖检变化
患猪耳部和腹下皮肤有许多明显的蓝紫色出血点。腹股沟淋巴结肿大、切面多汁，四肢关节肿大，切开关节皮肤可见皮下有明显的胶冻样液体。肺脏肉样实变，肺脏与肋骨相粘连，心包积液，心表面有纤维素性渗出物，肠系膜淋巴结出血。
4 实验室诊断
将2头病死猪及5份患猪血样送福建省农科院畜禽水产疾病诊疗中心进行检测，其结果如下。
4．1 血清学检测结果送检的5份患猪血样中，4份猪圆环病毒病抗体阳性，5份副猪嗜血杆菌病抗体均阳性；4份猪瘟抗体合格。
4．2 病毒PCR 检测结果取2头病死猪的肺脏、淋巴结、脾脏进行猪圆环病毒、蓝耳病病毒、猪瘟病毒检测。PCR结果显示，2份病死猪均为圆环病毒阳性。而蓝耳病病毒和猪瘟病毒均为阴性。
4．3 细菌学检测结果无菌采集2份病死猪的肺脏、胸腔积液、关节液等病料分别接种于自制的TSA固体培养基平板(含0．005％NAD和5％小牛血清)， 37℃恒温培养24～72 h后检查细菌生长情况。结果 2～3 d后可见培养基划线上有一些针尖大小、灰白色、透明的小菌落生长，经镜检为革兰氏阴性、呈多种形态的小杆菌，经生化试验进一步鉴定确认该细菌为副猪嗜血杆菌。
4．4 药敏试验将所分离的细菌再划线接种到自制的TSA固体培养基上．并用纸片法进行药敏试验，经37℃培养24～36 h后观察。结果显示，头孢噻呋钠、阿莫西林、氟苯尼考的抑菌圈均在20 mm以上。根据对该猪场发病情况、临床症状、病理剖检变化和实验室化验结果。可以确诊该猪场疫病为猪圆环病毒病与副猪嗜血杆菌病混合感染。
5 防治措施
药物治疗对临床健康的保育猪群采用全群拌料投药预防。具体做法：每吨饲料中添加10％黄芪多糖1 000 g、10％阿莫西林1 000 g、10％氟苯尼考 1 000 g以及适量多维．连用7 d，停药1周后再重复用药1周。对发病猪只选择头孢噻呋钠和10％黄芪多糖注射液进行肌肉注射。1次／d，连用3 d。