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1.确定催产期。亲鱼性腺发育接近成熟到开始退化之前进行催产最合适。
2.催产剂。使用的催产剂有:
①性成熟鲻 、鲤鱼的脑垂体;
②西那荷林激素(Synahorin),一种绒毛膜促性腺激素和哺乳动物脑垂体提取液的混合物;
③促黄体素释放激素类似物(LRH-A);
④绒毛膜促性腺激素(HCG);
⑤其他促性腺激素。
3.注射方法。一般在卵径0.6~0.7毫米时注射,采用两针注射,第一针注射剂量为总剂量的1/3,第二针再将剩余的药量全部注入鱼体。间隔时间常为24-48小时。雄鱼如果成熟好,可在雌鱼注射第二次时进行一次注射,剂量为雌鱼的一半。如果成熟度差,也可分二次注射,第一次的剂量与雌鱼一样,第二次剂量减半。一般雌鱼在第2次注射后24小时内产卵。催产后亲鱼可自行产卵。但有的要进行人工授精,方法是将成熟的卵子及精液挤在盆内,然后用羽毛搅拌,加入少量新鲜海水,静止2~3分钟,使其充分受精。然后用新鲜海水洗2~3次。
4.剂量。雌鱼总剂量200-240微克LRH-A和2700-3800国际单位HCG,雄鱼总剂量80-100微克LRH-A和2700-3800国际单位HCG。
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林蛙的人工催产
在自然条件下,达到性成熟的雌、雄蛙个体,一到繁殖季节,就开始抱对产卵繁殖。但由于亲蛙的成熟度不一,加之气候、环境因素等影响,其抱对产卵的时间有先有后。因此,不但繁殖时间拖延很长,而且孵化出的蝌蚪规格也参差不齐。 为了使亲蛙能够集中抱对产卵,缩短繁殖时间,获得规格整齐的种苗,有必要对亲蛙进行人工催产。
1.亲蛙成熟度的鉴别成熟良好的雌蛙,腹部膨大柔软,对雄蛙发情的鸣叫有明显的反应,并回以低沉的呼应叫声,愿意接近并依恋雄蛙,且喜欢与之在水面聚群追逐嬉戏,不拒绝雄蛙的拥抱。这样的雌蛙,即使不施以人工催产,也能很顺利地产卵。
成熟度较差的雌蛙,腹部膨大程度较小,弹性较差,对雄蛙不感兴趣,对雄蛙的发情鸣叫无反应,躲避雄蛙的接近,喜欢单独活动,拒绝雄蛙的拥抱。一对这部分亲蛙,必须施以人工催产、才能达到与成熟良好的亲蛙同期产卵的目的。
2.催情药物目前使用的催情药物,主要有绒毛膜促性腺激素(HCG)、促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A)及林蛙脑垂体等三种。前两种药物有商品出售,而林蛙脑垂体需使用者自己摘取制备。
脑垂体的摘取:取活的成体林蛙(非同种亦可)若干,用剪刀从两侧嘴角剪开至鼓膜后,然后在鼓膜后横着将头剪下;把口腔上鹗的皮肤向前方翻起,露出头骨,用剪刀从枕骨大孔两侧向眼前方各斜剪一刀;将剪成三角形的骨片向前方翻折提起,露出脑的腹面;至此,在脑的视神经交叉处可见到一个埋于淋巴组织内的粉红色小体脑垂体,用尖镊子拨离脑垂体周围的结缔组织,将脑垂体取出。
取出的脑垂体可鲜用,也可用丙酮或无水酒精浸泡脱水脱脂后,干燥存放备用干燥存放的脑垂体,可保存1-2年时间。
药液制备:把鲜脑垂体或于燥保存的脑垂体,在经过消毒处理的研钵内研细成末或粉状,然后加入适量0.65%的生理盐水制成悬液,沉淀后取其上层清液备用。
3.催情药物剂量催情药物主要用于雌蛙,因雄蛙较雌蛙提前1周左右进人发情期,一般不需要注射药物来促进精子的生成或成熟,但为了促进其发情强度,也可酌情给雄蛙注射相当于雌蛙用量一半的药量。
上述三种药物,可单独使用,也可混合使用,一般混合使用效果会更好些。
单独使用时,促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A)为每千克体重30微克;绒毛膜促性腺激素(HCG)为每千克体重1 200国际单位;林蛙脑垂体为每千克体重15-20个。
由于林蛙躯体较小,注人体内催情药水的体积不能太多,所以,催情药物的浓度要配得高一些,注入每只亲蛙体内催情药水的体积以0.5毫升左右为宜。
4.注射方法与效应时间注射方法采用肌肉注射或腹部皮下注射,一般只需注射一次。肌肉注射部位在臀部.以45℃角刺入,进针深度1.5厘米左右。腹部皮下注射时,用镊子夹起肚皮,以水平方向刺人,进针深度2厘米左右。
催情注射时最好两人配合操作,一人双手握住蛙体,一人以右手持注射器,左手拿消毒棉球轻抵注射部位,退针时,左手用棉球轻按揉针孔,防止药水外溢。
将注射了催情药物后的亲蛙,按1:1的性比放入产卵池内。在适宜的水温和适宜的成熟度情况下,催产后的效应时间为40- 48小时,雌、雄亲蛙即开始抱对,继而排卵、排精,完成受精过程。如果超过48小时,仍无抱对现象,则需做第二次催情,第二次催情的药物剂量为第一次的1/2。
这种采用人工催产、自然产卵受精的方法,可获得理想的人工繁殖效果。值得注意的是,在亲蛙发情抱对时,一定要保持环境的安静,否则一旦受到外界的刺激或惊吓,雄蛙就会产生僵直现象,需数分钟才能恢复过来。因此,要严禁繁殖场所有人为干扰,以免影响产卵和受精率。
杂色鲍人工催产技术
当亲鲍性腺已成熟、饵料板上已长出饵料,便可挑选亲鲍进行催产。发育良好的亲鲍软体部肥满,性腺颜色鲜明并覆盖大部分角状器官与内脏囊,角状器官肥大隆起。诱导亲鲍排精产卵的方法主要有变温刺激法、阴干诱导法、紫外线照射海水诱导法和阴干、变温、紫外线照射海水综合诱导法等。目前以紫外线照射海水法及过氧化氢海水法在国内外应用较为普遍。诱导的关键在于掌握亲鲍性腺充分成熟的时机。用于诱导的亲鲍一般雌雄分开处理,雌雄比为1:5~1:10。
(1) 变温刺激法
先把亲鲍放入催产槽中静养30分钟,然后开始升温(借加热棒)刺激,60分钟升温4℃(譬如原水温为26℃,则预定30℃为刺激上限),这时亲鲍活动能力明显下降,多数伏于槽底。停留30分钟后开始降温(借室内空调或在槽内置用塑料袋装冰块),随着温度下降,亲鲍逐渐恢复活动能力。在升降温过程中要进行充气。在开始降温的20分钟后,雄鲍来回爬行于水槽的底部和壁上,然后陆续停附下来,开始排精。雌鲍对变温刺激的反应比较迟钝,产前的活动也和雄鲍不同,一般爬至接近水面的槽壁上,把大量的卵产于水面附近,然后爬入水中,一段时间后再次爬回水面附近产卵。雌鲍经过3~4次产卵,性腺中的卵一般可产尽。如果在变温刺激2~3次后,亲鲍未反应,可用流水刺激1~2小时,这样也可促使亲鲍排精产卵。若雄鲍已先排出精液,即使加入少量的精液到雌鲍的产卵槽里,也能诱导雌鲍产卵。
(2) 阴干诱导法
把亲鲍露空刺激1~2小时后,置入过滤海水中,或者每隔30分钟把摧产槽内的海水排干,阴干15~20分钟。照上述方法反复进行几次,都可使亲鲍自行排精产卵。用这种方法诱导排出的精卵,质量好,受精率高,但所用亲鲍的成熟度要好。
(3) 紫外线照射海水诱导法
用市售紫外线饮水消毒昭照射处理海水,或者用市售石英管紫外线杀菌灯(波长253.7nm,功率20~40瓦)并在其两端接上导线再用环氧树脂密封绝缘后浸入水槽中照射处理海水。照射量在100~800毫瓦时/升海水间对卵及幼体发育无不良影响,并且随照射量增大诱导效果增强,生产性育苗的照射量大多采用200~400毫瓦时/升。有时,为了强化刺激效果,亲鲍在放入紫外线照射海水前先阴干0.5~1小时,紫外线照射海水再升温3~4℃。照射量的计算方法:照射量(毫瓦时/升)=紫外线灯总功率(毫瓦)照射时间(小时)照射水量(升)。同时应注意紫外线对眼睛及皮肤强烈刺激作用,操作时应配戴防护眼镜,并避免长时间直接照射皮肤。
(4) 过氧化氢海水处理诱导法
可用市售过氧化氢含量30%的试剂或医药消毒用过氧化氢含量3%的双氧水,每1升海水加入过氧化氢含量30%的试剂0.3这种毫升,配制成过氧化氢溶液,接着把雌雄亲鲍分开装入塑料网纱袋中,放进溶液里浸泡30~60分钟,然后取出,用海水冲洗,再把亲鲍逐个放入采卵盆中,加入砂滤海水。经处理后,一般在30分钟后亲鲍即大量排精产卵。
(5) 阴干、变温、紫外线照射海水 综合诱导法
首先,把选择好的亲鲍放在催产槽内,断饵、洁水、充气,并静养24小时,于第2天晚上6时左右取出,分散露空30~60分钟,然后雌雄分开放入预先用紫外线照射过的砂滤海水中,采用加热棒和空调(或冰块)进行升降温处理,升降的幅度一般为3℃~5℃,时间2小时左右,升温上限为30℃。经过这样的处理,雄鲍一般在第轼天晚上12时左右,升温上限为30℃。经过这样的处理,雄鲍一般在第2天晚上12时前开始排精,雌鲍在第3天凌晨2时左右产卵,至早晨6时前排尽卵子。
(6) 蓄电池养池自然产卵法
在鲍的生殖季节,常常发现亲鲍夜间在蓄养池里自行排放精卵的现象。因此在亲列产卵期间,每天傍晚可把蓄养池里的饵料清除干净,换上新鲜砂滤海水,然后放进腺充分成熟的亲鲍,翌日清晨检查,如发现亲鲍排精产卵,即可把卵子收集起来进行孵化。这些卵子大部分是正常卵,受精率高,胚体健壮。
大口鲶的人工催产
1.催产亲鱼的挑选
催产亲鱼的选择标准是:雌鱼腹部膨大,仰腹可见明显的卵巢轮廓,生殖乳突圆钝红肿,生殖孔扩张,挖卵器可顺利进入卵巢腔,挖出的卵粒大而饱满、均匀。雄鱼胸鳍棘后缘上的锯齿棘手,生殖乳突尖而长,稍压腹部有乳白色精液流出。雌雄比例1:1,或雄鱼略多于雌鱼。
2.催产
亲鱼在普通催产池或网箱中均可催产,每次催产2-3组,催产水温为18-27度超出这个范围效果很差。各种催产剂均有效,混合剂效果更佳常用剂量和注射方法是:雌鱼每千克体重注射鲤垂体(PG)1和绒毛膜促性腺激素(HCG) 2000- 3000IU.从胸鳍基部分两针注射,第1针注入总剂量的1/5,第2 针注入余量,针距8-10h;雄鱼剂量为雌鱼总剂量的50%-60%,一针或两针注射均可。注射后的亲鱼应冲水刺激,促进排卵发情。
3.授精与孵化
自然产卵时亲鱼易互相咬斗,故以人工授精为好。水温18- 23度时.效应时间为16-9h人工授精需及时,精液用0.7%-0.8%生理盐水稀释后再倒入卵上混合均匀受精。受精卵均匀地粘附在聚乙烯网布或棕片上并置于孵化池或孵化箱中,流水孵化。受精卵脱粘后也可放在微流水或静水中充气孵化,但效果稍差。孵化用水要水净氧足(溶氧量在6 mg月以上)。受精卵应避免阳光曝晒,也要防止低温滋生水霉。水温恒定在22-23度,受精卵经 40 h孵化可全部出苗。脱膜后1-2天内,鱼苗要及时转出培育。
4.早繁与秋繁
大口贴一般只在4月下旬至5月份繁殖一次。若要早繁,可在 2月份将培育池水温逐渐提高至18度左右,亲鱼按每干克体重注射2 mg多巴胺合成抑制剂(RES)加2 rtg类似物(LRH-A )催熟,并加强喂养和冲水,可促使亲鱼性腺提早成熟一个多月,在3月下旬即可人工繁殖。春繁过的亲鱼再放清水池中稀养,每日投喂适量鲜活饲料,每2日冲水1次,促进亲鱼性腺迅速再发育,必要时可打催熟针,并控制好水温,至秋季8-9月份亲鱼性腺再次成熟,可开展秋繁。华中地区一年可繁殖2次,广东南海,一年可繁殖3~4 次.
黄鳝的人工催产技术介绍
亲鳝经过精心培育,到6月下旬至7月上旬,便可挑选性成熟好的雌雄个体进行人工催产。性成熟好的标志是:雌鳝腹部膨大柔软,卵巢轮廓明显,腹部呈橘红色,微透明,生殖孔红肿;雄鳝腹面有血丝状斑纹,轻压腹部有白色透明物流出。
常用催产剂是促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A)或绒毛膜促性腺激素(HCG),以使用LRH-A为主。使用量因亲鳝的个体大小而有所不同,一般是个体大的用量大些,个体小的用量就小些。如果使用HCG,一次性注射时使用剂量按每克体重用2个国际单位计。亲鳝(雌、雄)体重与LRH-A用量的关系如下:
1、亲雌鳝的体重为20~50克,LRH-A一次性注射时的用量推荐值为5~10微克;亲雌鳝的体重为50~150克,LRH-A一次性注射时的用量推荐值为50~150微克;亲雌鳝的体重为150~250克,LRH-A一次性注射时的用量推荐值为15~30微克。
2、亲雄鳝的体重为120~300克,LRH-A一次性注射时的用量推荐值为15~20微克;亲雄鳝的体重为300~500克,LRH-A一次性注射时的用量推荐值为20~30微克。
注射部位为腹腔,进针深度不超过0.5厘米,每尾亲鳝注射的催产剂药液量为1毫升。由于亲鳝的效应时间与性别有关,通常是雄性鳝的效应时间比雌性鳝的短,所以在实际生产当中,雄性亲鳝的注射时间要比雌性亲鳝晚24小时左右。将经过催产注射后的亲鳝放入网箱中暂养,水深保持在30~40厘米,并注意经常冲加新水,水温保持25~28℃。
异育银鲫人工催产
在湖北等长江流域地区,一般异育银鲫人工繁殖时期为4月上旬至4月下旬。当水温上升到18~20℃后,要勤于观察鱼情,特别是晴天的早晨,必须天天查看,只要未见流卵,可经一周左右的亲鱼强化培育,等天气稳定后,再进行人工催产为佳。
人工催产药物可用脑垂体,也可用促排卵素。脑垂体的用量一般按每千克亲鱼体重4~5毫克。在多年的人工催产实践中,普遍采用的是一种脑垂体十绒毛膜促性腺激素十促排卵素的混合配方,每千克雌鱼所用的剂量是:
第一次注射:0.4毫克脑垂体十100国际单位绒毛膜促性腺激素十2微克促排卵素;
第二次注射:400国际单位绒毛膜促性腺激素十6微克促排卵素。
雄鱼一般是在雌鱼第二次注射时,或以雌鱼的1/3剂量或仅按每千克体重注射1~2毫克脑垂体。对于性腺发育较好的亲鱼,也可采用一次注射法,这样做既可减少一次注射的工作量,有利于休息和工作,又使亲鱼避免了一次损伤。已注射的雌、雄亲鱼,可分开在网箱或在产卵池中待产。在水温20℃左右时,催产的效应时间一般为12~15小时,即可产卵。
淡水白鲳的人工催产
催产药物一般采用鲤脑垂体(PG)、绒毛膜促性腺激素(HCG)、促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A)、多巴胺抑制剂(RES)、马来酸地欧酮(DOM)等,可使用单一激素或几种激素混合使用。注射剂量与注射次数要根据亲鱼性腺发育程度、水温等情况灵活掌握。湖北某市水产良种场的经验是:雌鱼1次性注射,雄鱼不注射药剂;每千克雌鱼用药剂量为:RES 5 mg-I-I.RH-A 10 tig+PG 0. 5 mg,或者RES 4 mg+LRH-A15 lug十PG1mg,结果催产率达80.8%,受精率达69. 5%。
注射后的亲鱼直接放入产卵池中,产卵池可用四大家鱼催情的产卵池,40-50 m2的池中可放亲鱼40尾,雌雄按1:1一2配组(20组)。保持连续不断地冲水刺激,亲鱼在产卵池中自行产卵、受精。
人工催情产卵的最适水温26-30度,亲鱼注射药物后的效应时间为6-8h。雌雄鱼发情明显,激烈地追逐,在水中发出咯!咯!咯!的求偶声音。若水温在32 度以上时,产卵的受精率很低,一般10%左右。产卵受精结束后,亲鱼成群地在水面上漫游。也可以进行人工授精。