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羊的胚胎移植技术是通过采用外源激素对优秀供体母羊进行超排处理，在胚胎发育早期从子宫内将胚胎取出，在体外处理后，再移植到另一只同种的经过同期化的受体羊内，使其在受体内发育成新个体，直至分娩。羊胚胎移植可极大地提高优秀供体母羊的利用率，是羊的纯种繁育、快速扩繁及提高优质种羊繁殖率的重要措施之一，同时可使种羊实现批量同期生产，便于饲养管理，提高成活率，降低生产成本。羊的胚胎移植过程是系统的复杂的生物工程，任何一个环节因素都直接影响胚胎移植效果，现主要从以下几方面来探讨提高羊的胚胎移植妊娠率。
1胚胎因素
1.1供体的选择
提供胚胎的母畜称为供体，选择合适的供体肉羊是移植成功与否的前提和基础。选择经济价值和育种价值较高，健康无病，生殖机能正常，结构较好，体型外貌符合品种要求，遗传性能稳定，年龄在2～5岁的优质肉羊。
1.2供体羊的友情鉴定及人工授精
供体超数排卵后，用试情公羊进行试情，试情时间不少于30min。如果供体羊呜叫、精神不安、食欲减退、阴道流出大量黏液、主动接受试情羊的爬跨或爬跨试情羊并追随公羊者为发情。
精液要求来源于同品种公羊，公羊谱系健全，遗传性能稳定，生产性能优良，精液品质良好。
确认发情后，即进行第一次输精，之后每隔12h输精1次，共输精3～4次直至供体不再表现发情为止。
公羊精子在母羊体内保持活力的持续时间为24—48h，而卵子排出后，保持有受精能力的持续时间为12～16h，所以做到适时发情、适时输精是非常关键的。否则会造成难以受精或即使受精也会出现早期胚胎退化等现象，因而影响胚胎的质量。
1.3胚胎采集
手术冲胚时，术者手臂及手术部位周围羊毛要刮净，皮肤要消毒，与胚胎接触的一切器具、冲卵液等都要进行消毒灭菌处理，防止污染胚胎，尽量做到无菌操作；冲卵液要事先预热，防止对胚胎形成冷应激。
1.4胚胎的保存
鲜胚移植时，胚胎在体外保存时间最好不要超过2h，以降低外环境的不良影响，提高移植受胎率。如果确有其他因素影响，不能及时移植，胚胎需要保存较长时间，应每隔2h换1次胚胎保存液，保存温度不宜太高，要缓慢降温至20～25℃保存。
2.受体因素
2..1受体的选择
接受胚胎的母畜称为受体，受体羊是胚胎移植成功的基础。选择适应性强，体型较大，泌乳能力强，膘情中等，体质强健，繁殖率高，无生殖道疾病，可繁殖的2～4岁的经产母羊，老龄羊及单胎品种羊处理效果较差，一般可选择经产的小尾寒羊作为受体。
2..2供、受体的同期化程度
供、受体羊的同期发情水平是影响移植妊娠率的关键因素。在胚胎移植中，供体母羊和受体母羊两者生殖系统处于相同的生理状态，胚胎才能在受体母羊内继续发育生长，这就需要供体和受体发情时间吻合，二者子宫环境一致。供体和受体的同步发情差越小，受胎率越高，一般选择供体与受体同步发情差在±12h以内，移植妊娠率较高。
2..3受体的饲养管理
受体羊手术前2个月应进行强化饲养。在胚胎移植的前期和后期，要保持均衡的营养水平和良好的体况，防止过肥或过瘦，蛋白质饲料、能量饲料、矿物质饲料、维生素等要合理搭配，不要随意变换，避免长途运输、意外惊吓、变换环境，防止出现应激反应。防止饲喂腐败变质的饲草饲料，还要注意防疫和驱虫。在受体进行同期发情处理前，要完成所有疫苗接种和驱虫工作。在胚胎移植期间，不要随意使用抗寄生虫类药物和疫苗等，避免一些药物对胚胎形成和发育造成影响。
对术后羊只进行精心管理，除了注射必要的抗感染药物外，还应随时观察羊的采食、排泄情况，必要时，还要测量体温、检查伤口。发现感染，立即采取措施。受体羊随着胎儿的发育，对营养的需求量增加，尤其是怀孕后期，不仅要供给足够的营养丰富的精、粗饲料，还要注意矿物元素和维生素A、维生素D、维生素E的供给，特别是胡萝卜的补充，圈舍保持清洁、干燥，饲养密度不宜太大，避免引起流产。
3技术因素
胚胎移植操作技术人员必须既要有胚胎移植的理论知识，又要有较为熟练的外科手术经验，操作规范、移植位置适宜、动作迅速、胚胎体外停留时间短，受胎率高。实践证明，通过子宫角采集的6～7日龄的胚胎，要比通过输卵管采集的3日龄以内的胚胎受胎率高，且供体羊不易发生黏连，胚胎移植效果较好。
4环境因素
4.1无菌操作
手术前要对所有接触胚胎的手术器械、液体、培养皿等进行严格的消毒处理。实验室要彻底清洁并用紫外线灯照射消毒。手术人员术前进行手臂消毒并穿戴无菌工作衣、帽、口罩和手套。
4.2移植季节
羊的发情周期受光照和温度影响，具有季节性。在繁殖季节，母羊的卵巢处于活动状态，卵泡发育才能成熟，表现正常发情；在非繁殖季节母，羊的卵巢机能活动处于静止状态，不表现发情和排卵。因此，胚胎移植的适宜季节应依据当地的气候变化、羊的发情状况来选择，胚胎移植应在羊的发情季节来进行。当外界温度超过30℃时，母羊繁殖的一系列过程都会受到影响，最后会导致胚胎移植失败。所以胚胎移植最好避开高温季节，集中在羊的繁殖季节进行，实践证明，温度适宜的秋季受体胚胎移植效果最佳，其次是春季，冬季和夏季不宜实施胚胎移植手术。
4.3移植温度
移植手术室和检胚操作室的温差要尽可能缩小，检胚操作室的温度应控制在20～25℃。避免温差大影响胚胎质量，从而影响移植妊娠率。
5小结
胚胎移植技术作为良种肉羊快速繁育的重要手段，在生产实践中得到了一定的推广应用，但还没有完全达到产业化阶段，这是因为胚胎移植操作环节复杂，影响妊娠率的因素比较多，妊娠率还较低，相信随着人们对这些因素的不断研究和一一解决，胚胎移植技术一定能在羊的育种中发挥更大的作用。
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影响肉绵羊胚胎移植的因素
隋国香
（黑龙江省嫩江县畜牧兽医局畜牧站161499）
1胚胎因素
胚胎采集。采胚方法可选择输卵管采集法和子宫采集法。输卵管采集法一般是在供体母羊受精后前4天使用，尽管具有很高的回收率，但术后非常容易导致卵巢和输卵管伞出现黏连，从而使卵子以后的接收和运行过程受到影响，如果出现双侧同时黏连的现象，甚至可能使其终生无法受孕。目前，通常采用子宫采集法收集胚胎，通常在受精后的第6天进行，虽然这种方式的回收率比输卵管回收略低，但收集胚胎的胚龄稍大，同时经过子宫环境的自然选择，即使有一些胚胎可能发生退化，但移植存活的胚胎后能够使受体母羊具有很高的妊娠率。
胚胎形态。正常胚胎的形态是透明带完整、外观饱满，卵间隙较小，卵裂球界限清晰、大小均匀，同时细胞质也很均匀，没有明显的颗粒状物。如果胚胎发育不正常，其透明带发生变形，外观不圆整，卵间隙较大，卵裂球界限不清楚，细胞质比较浑浊，存在破碎的块状物。通常来说，胚胎具有正常的形态和发育时期，移植后具有较大的可能性发育成活。但是并不是指形态稍差的胚胎完全不能够用于移植胚胎，这是由于胚胎早期的调整性较大，一些小的缺陷能够在之后发育过程中进行弥补，然后再继续发育。因此，只要胚胎具有形态基本正常的卵裂球，即使形态存在一些其他问题，也能够用于移植，常常也能够使受体母羊受孕。
胚胎移植的部位。在胚胎移植过程中，移植的部位要根据胚胎的实际日龄以及采集前所在的部位来确定。通常来说，胚胎移植部位要与采集胚胎的部位相对应。在输卵管内移入胚胎时，在其深部移人具有较高的受胎率。在子宫角移人胚胎时，在子宫角项部也就是输卵管一侧的子宫角接合处附近移人5～6日龄的胚胎的存活率要高于移入到子宫角中部，之后随着胚胎日龄的增长，胚胎的移植部位也要相应的朝子宫角基部移动。一般来说，母羊发情后的第7天卵巢静脉内的孕酮浓度达到最高，并且能够相对恒定地持续到第15天，因此使母羊发情期的后段，受体与供体将有可能存在一段幅度较大的同步时间，这样能够保证移植成功率较大。
2.受体母羊
对受体母羊进行选择时，以选细毛绵羊为最好，这是由于细毛绵羊具有较强的季节性发情。胚胎移植通常选择在9～12月份进行，此时细毛绵羊机体正处于体质健壮、精力旺盛的阶段，能够使移植妊娠率较高。而其他品种母羊具有较差的同期发情性，因此导致黄体形成不一致的成熟度。另外，受体母羊最好选择已经生产一胎以上的经产母羊，年龄是2～4岁。如果受体母羊年龄较大，大部分会由于子宫内膜发生损伤、体质较差等原因而导致移植受胎率受到影响。另外，受体母羊在进行胚胎移植的前后必须加强饲养管理，这是由于受体母羊饲养管理的好坏直接与受胎率存在关系，也就是受体母羊胚胎移植前后的营养状况是否适宜会对整个生殖过程产生直接影响。如果受体母羊膘情良好，大多数胚胎着床后都能够正常发育成活。但如果营养条件较差，不利于胚胎着床和羔羊产出后的生长，使受体胚胎移植效果明显降低。
3移植操作
移植胚胎时可采取手术法或者非手术法。采取手术法移植胚胎能够损伤供体母羊，导致卵巢、子宫以及周围组织出现黏连，从而使优良种母羊重复使用的次数减少，不过采取腹腔镜技术进行非手术移植能够将这些缺点克服。据报道，当供、受体母羊的非同期发情时间在8h以内，采取腹腔镜移植胚胎的妊娠率基本上与正规手术法移植相同。但是要在生产实践中推广非手术法胚胎移植，还需要对操作技术进一步熟练，使用的仪器设备还要不断改进，如此才能使妊娠率提高效率。供体和受体母羊术后必须进行精心护理，尽可能防止发生应激反应。供体母羊术后发情属于正常现象，但受体母羊正好与之相反，如果术后出现发情，说明没有成功妊娠，也就是移植失败，这可能是由于胚胎在移植过程中丢失或移植后死亡造成。
4应激因素
在胚胎移植过程中，受体母羊如果改变饲养管理，或者气候温度发生改变，或者手术前的处于饥饿状态等，这些应激因素都能够导致机体出现非特异性应答反应，引起其体内的黄体出现退化，进而对胚胎的正常着床和发育产生影响。如果受体母羊处于持续的应激情况下，机体内的胎盘激素、褪黑素会失去活性，进而影响黄体状态，最终使胚胎的生存受到影响。另外，如果温度过高，能够使受体母羊减少分泌孕酮及促乳素，造成胚胎迟缓发育，甚至可能中止妊娠。因此，胚胎移植最好不要在7～9月份温度过高的阶段进行。
奶牛胚胎移植技术要点 奶牛胚胎移植的注意事项
奶牛胚胎移植是将供体母牛配种后的胚胎取出后,移植到另一头或数头生理状况相似的受体母牛的生殖道内的适宜位置,使其继续发育。奶牛胚胎移植技术对于发挥优良奶牛品种的繁殖潜力、快速扩大优良种群等方面有重要的意义,现对这项技术做简单的介绍。下面一起来了解一下：奶牛胚胎移植技术要点奶牛胚胎移植的注意事项。
1、奶牛胚胎移植的意义
胚胎移植技术可以将优良奶牛品种的繁殖潜力充分的发挥，可加快种群的改良速度，扩大优良种群的数量。在自然条件下奶牛一年可产一胎，进行胚胎移植可以使母牛免去妊娠期，胚胎取出后不久奶牛即可再次的发情、排卵、配种和受精，可在一定的时间内产生较多的后代，并且可利用超数排卵技术，一次获得多枚胚胎，生产出更多的后代。胚胎移植技术还具有保存品种资源的作用，可将胚胎在液氮中长期保存，对于保存特定品种资源的意义重大；目前我国多从国外引进优良的奶牛品种养殖，或者与我国当地品种杂交以培育出更为优良的品种，利用此项技术可以代替活畜引种，不但运输方便，节省费用，还可以避免一些疾病的传播；另外，购买冷冰的胚胎可以降低购买费用与运输费用，奶牛养殖场不用饲养种公牛和种母牛，还节约了饲养和管理的费用。
2、奶牛胚胎移植技术要点
奶牛胚胎移植技术其实是将多种繁殖技术综合起来的一项技术，包括超数排卵、胚胎的采集、胚胎的保存和胚胎的移植。
超数排卵是指利用激素处理供体母牛使其发情，同时排出数量较多且发育成熟的卵子，然后再经人工授精的方法获得数量稳定的可移植胚胎。所使用的激素通常为促卵泡素、氯前列烯醇、孕马血清、前列腺素和绒毛膜促性腺激素，使用的激素不同，超排处理的时间也不相同。另外，超数排卵的数量与激素的剂量也有关，如果剂量过大，则排卵的数量过多，会导致卵巢功能受损，因此激素的剂量要适宜，一般以每头母牛排10个左右卵子为宜。要对经超排处理的母牛做好发情的鉴定工作，注意发情表现，确定最佳的人工授精时间，另外，可以增加奶牛人工授精的次数，提高超排卵子的受精率。
胚胎采集与保存。胚胎采集的时间通常安排在母牛发情后的3-7天，方法有手术法和非外科手术法。其中非外科手术法使用的较为普遍。采集胚胎使用的冲卵管为二路式，其主要的操作方法是先将母牛保定，让其站立。为了使母牛安静，便于操作，可使用局部麻醉或者低剂量的全身麻醉。掏出直肠内的粪便，然后对母牛的后躯以及阴门进行彻底且全面的消毒。在二路采卵管内插入不锈钢内芯，并将采卵管导入阴道内，到达阴道窟窿，另一手在直肠内协助。慢慢的将导管插入子宫体，到达子宫角内5cm左右时将采卵管内的内芯拔出约2cm，然后再让采卵管沿子宫角弯曲的方向进入子宫角深部，直到将采卵管达到子宫角适当的位置。将采卵管内的不锈钢内芯全部抽出，然后通过冲采卵管注入冲卵液，再将冲卵液回收后置于集卵杯内，静置30min后，吸去上部液体，剩下的冲卵液在显微镜检查，然后将其移入到培养液中保存。一般冲卵液与胚胎培养液是通用的，保存在零下20℃的环境下。
胚胎移植。目前奶牛生产中普遍使用的胚胎移植方法为非外科移植法。在移植前要先对冲出来的胚胎进行质量的评定，只有质量过关的胚胎才可用于移植。且于移植的胚胎要求发育与采集日期一致，形态正常，透明带完整，胚胎的结构清楚，细胞突出胚胎整体部分不超过胚胎总体积的1／5，移植的方法是采用直肠把握子宫颈输精法将胚胎注入到子宫角的深处。为了提高受胎率，可以重复移植。
3、奶牛胚胎移植注意事项
选择适宜的受体牛，要求受体牛的体型较大，性情温顺，一般以改良牛为宜，使用最多的是西门塔尔的杂交改良后代，年龄一般选择3-6岁的经产母牛，要求受体牛健康无病，体况适宜。做好受体母牛的发情鉴定工作，要在母牛的发情阶段适时胚胎移植。在移植前要对受体牛进行短期的优饲，提供营养丰富、品质优良的饲料，以使其达到最佳的繁殖状态。在移植前要做好操作环境的卫生与消毒工作，还要对一些器械、用具等进行全面的消毒，操作人员的双手和手臂也要消毒。移植前要对受体牛进行麻醉处理，注意掌握好麻醉的剂量，如果剂量过大会导致奶牛的后肢麻痹无法站立，无法移植。保证移植胚胎的质量是获得较高受胎率的关键，因此要做好胚胎的鉴定工作。在进行胚胎移植时最好避开高温和严寒的季节，最好选择在每年3-5月和10-11月进行，如果在高温季节移植则要选择在一天中较为凉爽的时段进行。在移植时要熟练的掌握操作技术，防止在移植的过程中损伤子宫内膜。
在胚胎移植后要注意让母牛充分的休息，避免剧烈的运动，以免造成子宫收缩。胚胎移植成功后母牛会出现妊娠反应，在饮食上要多注意。移植后半个月左右在清晨取晨尿进行检测，或者抽血检查是否移植成功。对于成功妊娠的母牛要做好保胎的工作。
奶牛胚胎移植技术
一、概述牛胚胎移植的商业化应用开始于七十年代初期。当时，必须通过手术方法才能采集胚胎，由于奶牛的乳房影响手术的顺利进行，手术后往往还会影响奶牛以后的繁殖性能，因此，胚胎移植主要在肉牛中应用。1976年，一些研究小组报道了应用导管高效采集胚胎的非手术方法。随后，胚胎移植在奶牛中的应用得到了飞速发展。1974年，第一头胚胎移植登记荷斯坦奶牛在美国出生。七十年代后期，胚胎移植（ET）登记荷斯坦奶牛的数量每年以100%以上的速度增长，1980年达到8298头年。进入80年代后，随着非手术采胚法和移植技术的改进以及胚胎冷冻保存技术的发展，每年（ET）登记奶牛的数量在稳步增长，至1990年达到18727头年。截止1991年，美国登记的胚胎移植荷斯坦奶牛总数量已达到142598头。目前，44%的荷斯坦优秀种公牛是由胚胎移植培育的。九十年代以来，胚胎移植在发达国家中的增长速度有所减缓，但是技术含量越来越高，例如体外受精胚胎生产技术、转基因技术以及克隆技术的应用和研究得到加强。近几年来，胚胎移植在亚洲和南美一些国家中增长速度很快。从整个世界范围来看，牛胚胎移植的增长速度仍然很快。
二、胚胎移植技术
1.体内受精胚的移植1超数排卵在常规胚胎移植技术中，获得大量可用胚胎的主要途径是超数排卵（简称超排），因此，高效率的超排技术是胚胎移植技术能否在生产中推广应用的关键。应用于奶牛的超排激素主要有PMSG（孕马血清促性腺激素）和FSH（促卵胞素）。PMSG尽管只需一次性注射，省时省力，但是半衰期过长，可以导致卵巢的过度刺激以及对排卵、受精和随后的胚胎发育产生不利的影响，因此现在一般已不采用PMSG对奶牛进行超排处理。目前广泛应用于母牛的超排激素是FSH。用于奶牛超排的商品FSH均是从屠宰家畜的脑垂体中提取的，脑垂体不但能够分泌FSH，而且还能分泌LH，因此商品FSH制剂中都含较高水平的LH，不同厂家或同一厂家不同批次FSH制剂中的LH含量差异很大，所以商品FSH制剂的超排效果很不稳定。从理论上讲，在卵泡发育的早期，只有FSH对卵泡生长起启动和刺激作用，LH不起作用。只有在卵泡发育的晚期，卵泡颗粒细胞才开始出现LH受体，此时LH和FSH才起协同作用，共同促进卵泡的进一步生长和类固醇激素的合成。LH和FSH的协同促卵泡生长作用必须有一个合适的比例，LH含量过高可以导致生长卵泡的闭锁或黄体化。这一机理就是商品FSH制剂超排效果不理想的重要原因之一，国内外的许多报道事例已经证明了这一点。目前，加拿大生产的超纯度FSH（商品名Follrtropin）是世界公认的最理想的牛用超排药物。用Follrtropin进行的大规模商业超排处理结果显示，平均A、B级胚胎数为8.8/枚头次，我们利用中科院动物所提纯生产的FSH，在北京十三个奶牛育种场进行了大规模超排试验，试验结果表明：该激素的超排效果有些批次的效果很好；有些批次效果不理想。另据报道，牛的超排效果和摄入的营养水平有很大关系。奶牛为产奶目的而饲喂的日粮一般为高蛋白低能量日粮，即蛋白水平一般为17%；但这种日粮不利于奶牛多出胚胎。为了使奶牛多出胚胎，应降低日粮的蛋白水平，增加能量水平，最理想的办法是在超排处理前两周时，将蛋白水平降至12%，同时补饲大麦、玉米等高能量饲料。此外，在超排前适当补充复合维生素制剂也有利于提高牛的超排效果。
超数排卵方法
超数排卵（超排）的目的时为了增加有活力卵子的数量。通常在供体牛发情周期的功能性黄体期，一般在母牛发情周期的9～14天，肌肉注射PMSG或者FSH，以刺激卵巢产生额外的卵泡。待处理后供体牛再次发情时静脉注射LH或者HCG，以诱导卵泡排卵。但对成年母牛一般不需要外源LH或者HCG。
近年来，由于前列腺素F2α及其类似物如前列烯醇在超排方法上的应用，增加了超排处理的机动性，可在供体母牛发情周期的功能性黄体期的任何一天处理，而且增加了可用胚胎的比例。母牛在PG注射后的2～3天大多出现发情。
对超排处理的供体牛输精需2～3次，间隔12h，每次的输精量要大于正常的输精量，应保证有足够的有效精子。
2．供体和受体牛的准备
供体牛选择的首要条件是其遗传学价值及其健康和繁殖情况，所以，确定供体前需作必要的检查，经确定后要加强饲养管理，观察发情，确定正确的发情周期。每头供体牛需要准备5头受体牛，两者的发情开始时间前后相差不超过一天。
在一般情况下，不易找出若干头自然发情与供体牛发情时间相同的受体牛，所以在胚胎移植时往往采用对供体与受体牛进行同期发情处理。同时对供体牛进行超数排卵处理。
3.胚胎移植
在胚胎移植中，胚胎最终必须移植到合适的受体牛中才能受胎妊娠，产下优秀后代，因此受体牛的准备非常重要。在准备受体牛时，除了无繁殖疾病等一般要求外，重点应该考虑发情同期性问题。一般来说，受体牛与供体牛发情同期差在4!天内时，即发情后第563天的受体牛受胎效果比较理想。许多研究结果证明，发情时间早于供体牛的受体牛，其移植受胎率高于发情时间晚于供体的受体牛，如发情后第3天的受体牛，其移植受胎率高于发情后第5天的受体牛。其原因可能是发情后第3天的受体牛，其黄体功能更完善。综上所述，要提高胚胎移植受胎率必须人同期性上选择合适的受体牛。此外，对于发情时间稍晚于供体胚胎日龄的受体（即不到发情后第七天的受体），注射孕酮有利于受胎。
4.妊娠诊断
（1）直肠检查法通常在移植后1.5～3.0个月进行直肠检查,此时子宫继续增大，落入腹腔，可感觉到胎儿的浮动，子宫角出现孕脉,子宫壁可以触到子叶。
（2）超声波诊断一般可在移植２５天后检查,利用探头通过直肠轻轻的在子宫角上滑动，在荧光屏上可观察到中间灰白色周围黑色的图象———胎儿。
（3）妊娠后的饲养管理在移植后70～90天对受体牛进行妊娠检查，对已妊娠的受体要加强饲养管理,避免应激反应。妊娠受体在产前3个月要补充足量的维生素、微量元素，适当限制能量摄入，既要保证胎儿的正常发育，又要避免难产。根据当地的疾病发生情况，有目的地注射一些疫苗，以防胎儿流产或传染病发生。