养牛效果。
随着养猪业规模化、集约化、高效化的发展,猪人工授精技术在养猪生产中的应用越来越受到重视。猪人工授精技术是生猪品种改良的最有效方法,可提高良种的利用率,减少公猪的饲养量,从而减少饲养成本,降低生产费用。人工授精还可以克服配种工作中遇到的一些困难,可以显著提高配种受胎率,提高母猪的繁殖力,增加产仔数以及仔猪的质量,同时还可以减少母猪生殖道的疾病,对于延长母猪的使用年限起到重要的作用。还可以减少其他疾病的传播,对于提高生产的安全性起着重要的作用。另外,人工授精可以通过保存和运输精液,使母猪进行异地配种,解决了公猪不足地区的配种难题,是在各生猪养殖场都普遍应用的一项配种技术。
1公猪方面原因
公猪方面的主要原因是精液的品质,这是影响母猪发情期配种受胎率以及产仔数的最直接原因。导致精液品质下降的原因一方面是由于在对公猪采精后,没有对精液进行活力以及品质的检测,并且不进行稀释就直接用来输精,导致母猪的配种受胎率降低,产仔数减少。当精液中的死精数过高或者精子的活力过低时,都会影响人工授精的效果。另一方面,稀释时如果所选择的稀释液质量不好、存放时间过长、密封不好、受到污染等,会使稀释后的精液品质下降,而影响母猪的受胎率和产仔数,因此,在人工授精前要检测好精液的品质后再进行此项技术的操作。精液通过合理的保存可以在没有公猪或者没有新鲜精液的情况下使用,但是在保存过程中如果由于稀释液或者冰箱的原因,会导致精液的品质有所下降,用这些精液对给母猪进行输精后,必然会导致母猪的配种受胎率下降,产仔数减少。通常在没有合适精液的情况下,可以将母猪的配种时间向后推迟一个发情期,以使母猪保持正常的繁殖性能。精液在输精时的精液保管工作对精液的品质影响也很大,特别是在炎热的夏季和寒冷的冬天,如果精液瓶外露的时间过长,会使精液受到冷、热的刺激,品质发生变化,导致精子活力降低,死精数增加,从而使母猪配种后的配种受胎率和产仔数降低。因此,在夏季和冬季要注意输精时精液的保管工作,如果输精的数量较大,可将精液用泡沫箱存放,注意夏天在泡沫箱里面要放上冰块,冬天则要注意保温。
2.母猪方面原因
母猪自身的原因对人工授精技术的实施效果也有很大的影响作用。母猪的体况决定了母猪的繁殖性能,如果母猪的体况过肥或者过瘦都会影响母猪发情,出现发情不明显,发情异常的现象,有的母猪即使可正常发情输精配种,也易发生返情。即使配种成功,也会因为母猪日粮中缺乏某种或者某些营养物质而使胚胎获取的营养不足,易出现胚胎早期死亡的现象。因此,在母猪配种前要保持中等膘情的体况,并加强母猪日粮的调控工作。母猪患病是影响人工授精效果的重要原因之一,如当母猪患猪瘟后,易出现输精后返情的现象,即使成功受孕,在病毒的作用下也会发生胚胎早期死亡而使产仔数减少。另外,当母猪患不易被发现的隐性子宫炎时,则无论如何输精都不会成功受胎。因此,要加强母猪的疾病预防与治疗工作,在疾病痊愈后再进行人工授精,可以达到良好的配种效果。有的母猪患有先天的输卵管堵塞,这类母猪在输精后也不会受孕。因此,要做好母猪的选种工作,及时的淘汰不合格母猪,以提高猪群的繁殖力。
3人为原因
人为因素往往是影响猪人工授精技术效果的重要因素,在公猪精液和母猪都不存在问题的情况下,人工授精效果不好通常就是由于该项技术操作不当而引起的。其影响主要表现为没有做好母猪的发情工作。在观察母猪发情时,有的配种员疏忽了母猪的一些发情表现,如只注意母猪阴户的变化,没有掌握到母猪最佳的配种时间,配种过早或过晚。通常母猪在出现发情症状后的30~36h会表现出现站立反应,38~41h开始排卵、卵子的受精能力可持续6h,精子在阴道内可存活24h,所以输精时间应选择在母猪出现站立反应后的8~12h,二次配种则要间隔12h。在输精前,如果准备工作不到位,如没有对配种员的双手以及母猪的外阴进行清洗、消毒,很容易将病菌带人母猪的阴道和子宫,而引发子宫炎,从而使人工授精效果降低。因此,不可忽视输精前的消毒工作,并且要选择适宜的消毒液。输精时的输精方法以及输精部位对配种受胎率影响极大,在输精时,要旋转插入输精管,不可硬插,否则易损伤阴道,在输精时要抚摸母猪的外阴和或乳房,刺激母猪兴奋,可提高人工授精的效果。输精时不可过于着急,保持5min以上的有效输精时间,并注意是否有精液倒流的现象,否则会影响配种效果。人工授精工作操作完后的工作对母猪的配种受胎率也有着一定的影响,在输完精后,母猪不可以马上卧下,这样易导致精液倒流,在输完精后,可拍打母猪臀部让其运动。
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家禽人工授精率的影响因素
人工授精技术包括:公鸡精液的产生、精液的产生、精液的采集和处理、输精三个环节,其中人的因素尤为重要,只有尽心尽责地把握好这些环节,才能更好地做好人工授精工作。下面我们就来具体了解一下:家禽人工授精率的影响因素。
1、采精
采精者将公鸡放在某种支撑面上,控制其腿部,向下扣牢翅膀,以防扑打。然后采精者用右手有节奏地按摩其耻骨正下方尾部的最末端,目的在于引起一个射精反射。右手掌持另一合适的精液小容器,通常用一个小的有刻度的量筒,让手指不受束缚地进行刺激。与此同时,左手将尾羽弯向头部,轻轻压迫尾脂区域。当射精反射出现时,两只手的拇指和食指同时动作,直到反射消失。这个动作中,左手的指头也要用来猎取位于输卵管下端的精液。这种方法在大规模的商业性操作中,常用一个特别设计的吸引仪器直接从公鸡的交媾器官把精液导入一个保持10-15℃的保温瓶中,这样的温度可使精子的代谢活动变慢而无损其细胞,这种仪器也有利于完全的采精。
2、精液的保存和稀释
虽然家禽的精子在保存数天后仍有相当的活力,但以射精和输精之间的间隔少于30min时能获得最好的结果,最好不要超过1h。精子在公鸡的输卵管中还不活泼,但一接触空气,活力就会立刻变得很强。这种活动牵涉到氧化和糖酵解的过程,引起精子赖以存活的基质很快被耗尽。射出精液代谢活动的结果,逐渐在样品的正上方形成二氧化碳,而使禽类的精子活力下降。为了保存精子的最大功能,最好使样品上方的空间与样品本身之比减少到2:1,这可用一个适当大小的容器来完成。如果采用稀释液,应当在正要授精之前添加。最简单的和最实用的稀释液是1.025%的生理盐水,pH值调节至7-8之间,其中再加入一种抗菌素,例如每毫升加入200-400μg的二氢链霉素。在临近授精之前加入果糖,对精子的存活是有益的,稀释液与精液比例为1:1时,稀释效果最好。
3、授精技术
人工授精的适宜剂量因家禽种类而异,这个差异主要是由于精子在精液中的浓度和需要剂量之间的逆相关。用完全或不稀释的精液时,推荐剂量是:鸡为0.1mL,火鸡为0.025mL,鸭为0.3mL,鹅为0.05mL。
给母鸡或者火鸡授精的方法比较简单,把母鸡安放在术者左手上,用左右手掌轻压泄殖腔和腹部以促进输卵管翻出,但只有正在产卵的母禽才容易操作。在阴道的末端露出后,把一只含有精液的注射器很快地插入阴道内约为3cm,并将精液射入。注射器抽出前在腹部的压力要放松,以便输卵管缩回,这样可避免收缩的阴道挤出精液。授精过程对母禽是无损害。事实上,很多产卵母鸡于抓起或轻轻触摸其腰部时就立刻翻出阴道。把含有精液的注射器插入到阴道的上半段是无益的。
采精和授精都需要术者有熟练的技术,母鸡和公鸡在与采精者和授精者能够合作前需要引起一些条件反射。一旦开始人工授精后,人工授精的鸡应当每隔1周重复1次,在火鸡则每2-3周重复1次。在给正在产卵盛期的母鸡授予活力强的精子时,于授精后48h就能产出第一个授精卵。
4、影响因素
采得精液的清洁度:鸟类泌尿生殖道和消化道的特殊解剖结构使精液容易被粪尿所污染,当人工授精保定家禽时,常常引起相当数量粪便的排泄,这在公禽尤其如此,但自然交配则完全没有这种情况。精液中存在粪便对于精子的生存是有害的,因结肠部位微生物,如结肠型细菌和葡萄球菌属进入精液中,使精液内的菌系问题更为严重。这些类型的细菌也在泄殖腔的各部分大量出现,平均一个精液样品的载菌量在用手刺激获得精液时必然特别严重,从输精管直接采得的精液可免受细菌污染。
抗生素:链霉素和四环素曾被推荐为控制精液内存在的细菌区系的一种方法,虽然这些添加剂是有效的,但更好的方法还是尽量避免污染。
采精时的环境温度:温度在20℃以上对维持精子的授精能力是有害的,这是由于精子在体外的代谢率高,以及精液中的细菌生长所致。在采精和授精时,较低的环境温度对人工授精的效果没有不利影响。
泄殖腔的渗出物:这些渗出物来自于肛门窝的淋巴褶和近输精管末端的许多血管区,在人工刺激公禽的过程中,不能完全避免它们的存在,但是在过重和过久的按摩并挤压时,精液内的渗出物太多,对精子的生存会带来害处。
混合精液:精液带有一种代表血液型的凝集素,当精液被泄殖腔的大量透明液污染时,这种凝集素的浓度更高。当把几只公禽的精液放在一起以供授精用时常常会发生精子凝集现象,这种凝聚是精液抗原和相应的天然抗体间的一种凝集反应,受精力势必下降。如果这种情况是由于精液中透明液的含量过高,则应设法避免采集这种样品。
一、公鸡对受精率的影响。
1.精子的遗传的特性:不同品种或品系之间,公鸡的性成熟期和精子的产生存在遗传差异。一般来说中型蛋鸡繁殖力最好,轻型蛋鸡和肉用型鸡稍次。据研究,公鸡的冠型与授精能力有高度相关,显性基因纯合的玫瑰冠(RR)公鸡的繁殖力比单冠公鸡要差,隐性基因杂合的公鸡(Rr)的繁殖力居中间。
2.营养因素:饲料中的蛋白质影响公鸡的发育和精子的产生,低蛋白质日粮会影响公鸡的性成熟期,体重达不到要求;高蛋白质则易造成酸中毒。一般认为育雏期16-18%的粗蛋白,育成期12-14%的粗蛋白即可满足需求。育雏育成期公母鸡可混养。据Wilson(1987)等报道,肉用型育成鸡日粮粗蛋白水平为12%、14%与18%相比精液品质无显著差异。在种用期由于蛋用公鸡和肉用公鸡体重差异较大,蛋白质水平也不一样。前苏联家禽营养标准规定,蛋用公鸡粗蛋白含量为18%,而肉用公鸡为14%。霍启光等(1991)用笼养29-36周龄中型蛋鸡试验表明,12.5%的蛋白质对繁殖性能和体重都不产生有害影响。Buckner(1986)报道,肉用公鸡每天粗蛋白摄入量为10.9克和18.7克,公鸡精液品质无显著差异。丁余荣(1993)报道,日粮中含粗蛋白11%时,无论精液量、精液品质和受精率都可行;而粗蛋白为15%、17%、19%则较差,且指出用含粗蛋白为12%的日粮饲喂公鸡的可采精率达98%;而含18%粗蛋白日粮的可采精率只有39%,故肉鸡饲养中公母一定要分开饲喂。另报道,公鸡日粮中粗蛋白含量与公鸡使用频率有关,公鸡使用强度大时粗蛋白水平相对要高;反之,则低。丁余荣(1991)报道,对肉用公鸡隔日采精,蛋白水平以10-12%为宜;如果使用频率较高,则粗蛋白要求达12-14%。
能量也是影响公鸡生殖的重要因素,主要是通过影响体重而影响繁殖力。一般认为肉用种公鸡ME最低消耗量,平养为320-399千卡/只·日,单只笼养288-390千卡/只·日。Buckner等(1986)报道,30-60周龄肉用种公鸡单笼饲养ME需要量为358千卡/只·日。Bootwalla等(1988)报道30-43周龄肉用种公鸡笼养条件下ME为303千卡/只·日,对繁殖力无不良影响,Sexton等报道30-58周龄肉用种公鸡ME水平为288千卡/只·日与384千卡/只·日相比,繁殖力无差异。通常蛋用公鸡与母鸡采食同一饲料。陈淑勤等(1983)报道,用代谢能为2760千卡,粗蛋白为16.33%,含钙3.5%与代谢能为2840千卡,粗蛋白为12.37%,含钙1.3%的饲料饲喂白来航公鸡,结果精液品质及受精率无明显差异。
此外,饲料中维生素和矿物质含量也影响公鸡精液的产生。有报道,饲料中缺VA引起精子数量减少,活力降低,并有畸形精子产生。缺VE,轻者受精率低,重者睾丸变性。据报道,锰的含量也影响受精率。
3.环境因素:首先表现为光照,通过影响垂体分泌促性腺激素影响精细管的生长发育和精子生成。一般来说,12小时或更长时间的光照能引起睾丸的最大生长和改善精子产生的机能,比如光照时间短于9小时则刺激作用减弱。Baайлай(1963)报道,洛岛红公鸡在16小时光照下比8小时和11-12小时光照更好。同时提出光照强度以10勒克司为好。低温延迟公鸡及生殖器官发育,高温则影响精液量和精液品质。BYH和Yactoh(1964)报道,室温为30℃对成年公鸡无影响,而室温39-49℃时2-5小时就能使13-18月龄的芦花洛克公鸡的射精量迅速降低50%。此外,不同季节公鸡生死活性有差异。
公鸡的饲养方式也影响生殖力,单独培育或与母鸡共同培育及种用期笼养或平养都对公鸡生殖系统的发育和机能有影响。陈淑勤等(1983)则认为不同密度下单养和双养都不造成受精率差异,但是单养公鸡精液量和精子密度均比双养高,差异显著。不同饲养密度单养组之间差异不显著。
4.繁殖因素:实践表明,并非所有留作种用的公鸡都能产生优良品质的精液。研究表明,公鸡的发育与受精率成正相关。据报道,120-150日龄的来航公鸡睾丸重与冠高、冠长的相关系数为0.541和0.737。如35日龄以前未形成典型冠子的公鸡41%是不育的。建议在60-70日龄或更早,通过冠子的大小进行第一次选择。5-6月龄,根据体重和人工采精训练选择腹部柔软,发育良好,对按摩能产生反公鸡全部淘汰。
二、生产期饲养管理
育出了品质优良的公,人是为以后良好的受精率奠定了关键的一步,只有在整个生产期对公鸡都进行精心饲养和管理,才能保证公鸡一直保持较好的配种能力。
1.进行公母分槽饲喂和控制体重。分槽饲喂,就是在20周龄以后,在母鸡料槽上加上防公鸡栅,防公鸡栅的间隙以42-44mm为宜,公鸡使用料线或料桶。给公鸡饲喂不同于母鸡的饲料,其中能量为2750千卡/kg,蛋白质为12.5%,并限制料量,确保公鸡合理增重,这能够有效地减少公鸡腿病的发生。使用分槽饲养时,必须加以精心管理与维护,防公鸡栅损坏要及时更换,确保公鸡偷食不到母鸡料,这一点尤其重要,否则就会功亏一篑反而扰乱公母鸡喂料计划,导致公鸡采食过量,体重迅速增加而变得体态臃肿,配种能力下降,母鸡因采食量不足而影响产蛋,造成受精率与产蛋率都不正常下降。
生产期种公鸡体重控制仍是一项很重要的任务,应该隔周抽测3-5%公鸡体重,如果体重下降或不正常上升,必须分析查找原因并加以补救。公鸡必须有充足的粒位,8-10只鸡/料桶,如果料位不足,会增加公鸡斗性,并造成强弱分化,死淘率增加。公鸡全期体重是不断增加的,因此维持能量也不断增加,生产期公鸡每4周应增加1克料量,在气温急剧变化的季节,如舍温也随着外界温度而急
剧变化的季节,如舍温也随着外界温度而急剧变化,当舍温在18-27℃以外时,公鸡的维持能量也随着舍温的改变而增高或减少。如果料量不变,当舍温在18℃以下时,公鸡首先表现活动量和配种次数减少,体重反而增加,舍温进一步降低,因维持能量不够配种次数进一步减少,体重也随之下降。在高于27℃时,因能量过多体重迅速增加,体态变得臃肿,加上热应激,公鸡惰于活动,配种能力迅速下降,这种变化造成的后果以后很难恢复。因此,当温度变化时,应及时增减料量,在临界温度外每增降1℃,维持能量减少或增加1.4%,约2克料量。
2.改善环境条件和预防腿病:公鸡体重较大,腿部支撑躯体的负荷较大,因此容易诱发腿病和脚垫病。患此病鸡活动量和配种次数都减少,体重增加较快,鸡群受精率会因此而下降。预防腿病,除控制体重外,还要保持床面清洁干爽和平整。床面经常潮湿的鸡群公鸡腿病发生率大大增加,鸡群受精率也较低。另外,新床面易磨损公鸡脚垫,也易造成腿病。因此,保持合理增重,经常铲粪、更换垫料、加强通风、保持床面清洁干燥是预防腿病关键。
3.做好保温和防暑降温工作
从上面曲线可以看出,冬季和夏季受精率下降幅度最大,前面说过温度变化对公鸡的影响,除加强公鸡管理外,还应尽量减少舍温变化幅度。长期的冷应激或热应激无论对公鸡或母鸡都非常不利。冬季应做好切实的保温工作,尽量保持温度在15℃以上。夏季提前做好防暑降温准备工作。如彩喷雾湿帘和添加负压通风等降温措施,把舍温降至30℃以下,以及料或水添加Vc,饮水中添加电解质等抗应激药物,这是防止冬夏季受精率下降的根本措施。
4.笼养公鸡的管理:笼养公鸡固定于笼中,较平养易于管理,除以上提到措施外,公鸡采精应周期性有规律地进行,以使公鸡形成良好的性反射。笼养公鸡活动量较少。因此料量配给低于平养,但饲料中矿物质,微量元素多维素的含量应高于平养公鸡的水平。
5.补充后备青年公鸡:公鸡达到较高周龄后,精液品质和配种能力都下降,种蛋质量和受精率也随之降低。为弥补这一缺陷,可考虑在45周龄时补充后备青年公鸡,但补充的公鸡数量应不少于公鸡总数的10%,数量过多,补充的公鸡因开始较恐惧,在形成新的群序过程中往往被原来的公鸡杀死或逐渐变弱。投放易在晚间进行,以减轻恐惧和应激。
猪的人工授精技术
人工授精技术在国外养猪业发达的国家和地区已经广泛运用,我国一些养猪大场也在运用该项技术进行猪的配种,该技术是养猪生产的高新技术,也是成熟的技术,运用这项技术可以加快猪种改良速度,有效降低生产成本,获得显著的经济效益。
1人工授精技术的优点
(1)提高优秀种公猪的利用率,加快猪种遗传改良的速度,提高商品猪质量。
(2)克服公、母猪因体格大小差异所造成的配种困难,提高配种妊娠率及分娩率。
(3)减少由于配种所带来的疾病传播。
(4)确保配种环节中的公猪精液质量,有利于母猪配种妊娠率的提高;克服时间和区域的差异,适时配种。
(5)减少种公猪饲养数量,节省公猪饲养费用,提高经济效益。
2采精
2.1采精前的准备及采精次数
2.1.1公猪的选择
采精用的公猪应满7月龄,体重在110~120kg的健康的优秀公猪(经性能测定后再选更佳)。种公猪一般每7d采精1次;满12月龄后,每周可增加到2次;成年后每周采精2~3次,采精次数过频,则精液中精子的密度降低,采精次数太少(如公猪长期不用),则精液中死精子及畸形精子增多。采精用的公猪一般使用2~3年后即淘汰,也可以根据猪种改良的实际需要,及时用更优秀的公猪进行更新。
2.1.2所需器械
采精杯(保温杯亦可),用前应预热并保持在37℃,(可在40℃左右的热水中预热)将消毒纱布或滤纸固定(橡皮筋)在杯口处,并微向内凹;乳胶手套一副;假台猪一个。
(3)准备一个采精的地方,该处要防止积水地滑。
(4)采精用公猪要预先进行采精训练,使之适应假台猪采精,要事先清理采精公猪的腹部及包皮部,除去脏物和剪掉包皮毛。
2.2采精方法
通常采用徒手采精法,此种方法由于不需要特别设备,操作简便易行。采精时,待公猪将阴茎完全伸出后,采精人用手握住公猪阴茎的前部,千万不要松手,并适当调整手心的松紧程度,以便能够采到更多的优质精液,在公猪刚刚射精时,要放弃最初的部分,为使公猪射精更多,可在公猪射精的适当时机用拇指摩擦公猪的龟头部。
3精液质量检查
3.1精液的一般性状检查
(1)射精量一次采精时公猪射出精液的数量为150~400m1。公猪射精过多或过少,应分析原因。过少可能采精次数过多,或公猪生殖机能衰退,或日常管理不当,或采精技术不熟练造成;过多则可能有水分混入,或是由于副性腺分泌过多,或混入尿液等。此外,精液中不应有毛发、尘土或其它污染物,含有凝固和成块物质(不同于胶状物质)的精液,表明生殖系统有炎症,这种精液不能使用。
(2)色泽正常精液为淡乳白色或淡灰白色。如精液呈淡绿色是混有脓液,呈淡红色是混有血液,呈黄色是混有尿液,均不能使用。
(3)气味一般正常精液无味或微带有腥味,带臭味或尿味的精液不正常,不能作输精用。
(4)PH值猪精液为弱碱性,PH值为7.5左右。可以用比色纸测定
3.2精子活率(活力)检查
活率是指在公猪精液中具有直线前进运动的精子在总数中所占的百分率。它与精子受精能力密切相关,是评定精液品质的重要指标。一般要求在每次采精后、精液稀释后、输精前均应进行活率检查。
悬滴检查法是在盖玻片上滴一滴精液,然后将盖玻片翻转覆盖在凹玻片的中间,制成悬滴标本。使用带有加热板的显微镜(或将显微镜置于37~38℃的保温箱中)检查,放大200~400倍观察精子呈直线运动的状况,按十级评分法评定。如视野中有10%的精子呈直线前进运动,评定为0.1级,有20%的精子呈直线前进运动,评定为0.2级,依此类推。活率不低于0.7级才可进行稀释配制,若为冷冻精液,解冻后不应低于0.3级,才可用作输精。
3.3精子密度检查
精子密度是指1ml精液中精子的数量。这也是评定精液品质的一个重要指标,同时也是确定输精量的依据。
估测法是检查精子密度常用的一种方法,可与精子活力检查同时进行。用玻棒取原精液一滴于载玻片上,加盖玻片做成压片,在显微镜下放大400~600倍检查,根据视野中精子分布情况和稠密度分为密、中、稀三个等级。密:整个视野中布满精子,精子之间的空隙小于一个精子长度,看不清各个精子的活动,每毫升密级精液含有精子约10亿个以上。中:视野中精子较多,可见各个精子活动,精子之间的间隙在1~2个精子长度间,每毫升中级精液含有精子约2~8亿个。稀:视野中精子很稀少,精子之间的间隙在2个精子长度以上,每毫升稀级精液含有精子约2亿个以下。在生产实践中,活力与密度结合评定。要求公猪精液达到中级密度,稀级密度活力在80%以上,才可用于输精。还可用类似血细胞计数法测定精子密度,较费工时,可用于全面检查公猪精液品质时采用。此外,还可用光学仪器,如分光光度计、光电比色计等测定,测定准确迅速。
3.4精子形态学检查
主要检查精子畸形率,即畸形精子占精子总数的百分率,要求畸形率不超过18~20%为宜,否则不能作输精用。
畸形精子种类很多,如头部畸形包括头部巨大,瘦小、细长、圆形、双头等,颈部畸形如颈部膨大,纤细、屈折、不全、带有原生质滴、不鲜明、双颈等;中段畸形包括弯曲、螺旋形、回旋、短小、长大、双尾等。畸形精子产生的原因有:公猪利用过度或饲养管理不良,或长期未配种,采精操作不当,睾丸和附睾疾病等。
检查方法:(1)抹片取原精液一滴作抹片,自然干燥;(2)用96%的酒精或5%福尔马林固定2~3min,用水冲洗;(3)再用美蓝或龙胆紫等染色液染色3~5min,用水冲洗;(4)待干后,在显微镜下放大400~600倍检查。也可将(2)、(3)步骤合二为一,即染色固定:用龙胆紫酒精液或红、蓝墨水染色3~5min,用水冲洗,干后检查。
3.5精液稀释与分装
(1)稀释液的准备:专用稀释剂有KlEV、BTS、20rPVa等。所有的商品稀释剂均表明了使用方法及用途(包括配制方法及保存天数)。
(2)稀释份数的确定:确定稀释份数的依据是精子密度,如果现场没有条件用显微镜检查精子密度,通常可进行6~8倍稀释。
(3)精液的稀释:应小心地将精液倒入稀释液,稀释液与精液温度一致,起码不能相差1℃。
(4)稀释后的精液分装:稀释后的精液即可用于母猪的输精,为方便使用、运输和保存、通常分装在特制的一次性塑料瓶或塑料袋中待用,塑料瓶或塑料袋的容量通常是100ml,可装60~80ml精液。可用不同颜色的塑料瓶装不同品种猪的精液,以示区分,并粘贴标签,注明日期,公猪品种,耳号及精液编号等,瓶装精液便于输精操作。
(5)新鲜精液在现场如即采即用,可用等渗的葡萄液(5%)或等渗的葡萄糖生理盐水(37℃)做63~5min8倍的稀释。这种方法省事又有效。
(6)抗生素等添加剂必须在稀释消毒冷却室温后再加入,否则影响其效价。
3.6注意事项
(1)分装后的精液如果要保存备用,则不可立即放入17℃左右的恒温冰箱内,应先留在冰箱外1h左右,让其温度下降,以免因温度下降过快而刺激精子,造成死精子等增多。
(2)从放人冰箱开始,每隔12h,要摇匀一层精液,因精子放置时间一长,会大部分沉淀。每次摇动时,动作要轻缓均匀,同时观察精液的色泽状况,并做好记录,发现异常及时处理。
(3)保存过程中,要切实注意冰箱内温度的变化(通过温度计的显示),以免因意想不到的原因而造成电压不稳而导致温度升高或降低。
(4)远距离购买精液时,运输是关键的环节。高温的夏天,一定要在双层泡沫保温箱放入冰块(17℃恒温),再放精液进行运输,以防止天气过热,死精太多,严寒的季节,要采取保温措施防止精液因寒冷使精子死亡。
肉羊人工授精技术
一、适用范围
本技术适用于规模养羊户、配种专业户和绵(山)羊人工授精站。
二、器械、用具的洗涤和消毒
1.新购入的用具、器械,要先将其表面擦干净,用2%~3%碳酸钠溶液清洗后,再用温水冲洗几次,并擦干或晾干,备用。
2.集精杯、输精器、吸管等用65%酒精棉球擦洗或煮沸消毒。
3.假阴道先用65%酒精棉球擦洗(连续使用时,可用96%酒精棉球消毒),再用0.9%氯化钠棉球擦洗数次,直至酒精气味完全消失为止。擦洗假阴道时注意不要将凡士林和污垢残留在橡皮内胎皱褶内。
4.金属器械可用65%酒精擦洗或用酒精灯火焰消毒。
5.凡士林应每天带瓶隔水煮沸消毒20分钟,瓶盖下垫滤纸,瓶底垫脱脂棉或纱布,以防煮沸时破裂。
6.工作服、纱布、毛巾等要经常清洗,保持清洁,并用蒸汽法或煮沸法进行消毒。
7.凡是接触精液的器械和用具,使用前必须用0.9%氯化钠溶液冲洗两次以上。
三、精液的采取
1.采精前的准备
①种公羊的选择与饲养管理。
种公羊年龄应在1.5~6.0岁之间,或体重在50千克以上时方可,要求体质结实,生产性能好,生殖器官发育正常,有明显品种特征,而且精液品质优良。公羊采精前1~1.5个月应加强饲养管理,提高营养标准,每天每只供给0.75~1.5千克混合精料。若采精次数多,每天再补喂2~3个鸡蛋。在加强饲养管理的同时,应对公羊进行驱虫、修蹄,并坚持每天刷拭羊体,每周进行2~4次采精训练。种公羊在配种前需排精15~20次,以排除陈旧精液,促进鲜精生成和提高其性欲。
②台母羊的选择。
采精用台母羊应选体格适中(根据种公羊体格而定)、体质结实、性情温驯、健康无疾病的羊只。采精前应对台母羊后躯进行擦拭消毒(避免用有气味的消毒剂),并提前2~3天注射雌激素诱导发情。若有发情的母羊更好。
③假阴道的准备。
将假阴道内胎套在外壳上,要求内胎舒展平整、表面光滑,再将集精杯插入假阴道一端的内层,深入2~3厘米。采精前用漏斗向假阴道的夹层中注入50~55℃的温水150~180毫升,保证采精时内腔的温度在38~42℃。用消毒过的玻璃棒蘸取灭菌的凡士林,由里向外均匀涂抹在内胎前1/2区域,使之润滑。从气门活塞处向假阴道夹层内吹气加压,使之松紧适度,一般以假阴道内胎呈三角形为宜。
2.采精方法
采精员蹲在母羊右侧后方,右手横握假阴道,活塞向下,中指和食指压住集精杯,其他手指和手掌握紧假阴道,安装集精杯的一端倾斜向上,假阴道与地面呈35~40度。当公羊爬跨母羊伸出阴茎时,采精员右手将假阴道推向母羊臀部与公羊阴茎相平行,左手轻轻托住阴茎包皮,细心而迅速地将阴茎导入假阴道内。当公羊耸身向前完成射精后,随公羊自母羊身上跳下时(/),采精员顺着公羊的动作将假阴道慢慢向后移动,轻轻取下,立即将集精杯一端向下,竖立假阴道,打开活塞,放出空气,取下集精杯,盖好杯盖,送精液处理室检查。集精杯取下后,立即将假阴道夹层里的水放出,拆卸清洗,消毒备用。
3.采精次数
种公羊采精次数要根据羊的年龄、体况和种用价值来确定。青年羊(1.5岁左右)每天采精次数以1~2次为宜,采精1天休息1天。成年公羊每天可采精3~4次,个别情况下可采精5~6次,每次采精应有1~2小时的间隔时间。频繁采精时,要保证成年种公羊每周有1~2天的休息时间,以免因过度消耗体力而造成体况明显下降。
四、精液品质监测
采出的精液,应立即进行品质监测,监测方法采用肉眼监测和显微镜监测两种。肉眼监测主要是评定射精量、颜色、状态等,显微镜监测主要是评定活力和密度。体质结实的公羊平均射精量为1~2毫升,精液外观为乳白色,比较浓稠,带有精液特有的气味,并呈回转滚动的云雾状,精子的密度越大、活力越强,则其云雾状越明显。精子活力是评定精液品质优劣的重要指标,一般对采精后、稀释后、输精前的精液应分别进行活力检查。方法是用已消毒的干净玻璃棒取出原精液1滴,或用生理盐水稀释过的精液1滴,滴在擦洗干净的干燥载玻片上,并盖上干净的盖玻片,然后在室温18℃以上条件下,用400~600倍的显微镜观察。根据在显微镜下所能观察到的直线前进运动精子占视野内总精子数的百分率来评定精子活力。如果精子全部呈直线前进运动,活力记为1.0,如果有50%的精子向前直线运动记为0.5,其余依此类推。活力0.3以上的精液方可用于输精。
为了确定稀释倍数和输精量,还要对精子密度进行检查。精子密度监测一般采用评定法。评定法依据显微镜视野内精子的稠密稀疏进行评定,操作简单,应用广泛,适用于羊群比较分散的地区。密度评定一般分为稠密、中等、稀薄3个等级,以密、中、稀表示。密即在显微镜视野中布满密集的精子,彼此间没有空隙,难于看出单个精子的活动情况;中即在显微镜视野中的精子,彼此间有1~2个精子长度的空隙,能清楚地看到单个精子的活动情况;稀即在显微镜视野中仅能看到少数精子,分散于各处,彼此间空隙很大,稀疏零散。用于输精的精液必须是密度评定为密或中的精液。
五、精液的稀释
在温度20~25℃和无菌条件下,用吸管将稀释液沿集精杯壁缓缓注入需要稀释的精液中,用玻璃棒轻轻搅匀。稀释液两种配方如下:①脱脂奶粉10克,卵黄10克,蒸馏水100毫升,青霉素10万国际单位。②柠檬酸钠1.4克,葡萄糖3.0克,卵黄20克,蒸馏水100毫升,青霉素10万国际单位。按以上配方配制时,分别将奶粉、柠檬酸钠、葡萄糖加入蒸馏水中,经过蒸煮消毒、过滤,最后加入卵黄和青霉素,振荡溶解后即制成了稀释液。稀释液应新鲜,精液和稀释液的温度应一致,一般可做2~4倍的稀释,以供鲜精输精之用。
六、精液的保存
1.常温保存。精液稀释后,在18~20℃的室温环境中,可保存6小时。
2.低温保存。将经过品质检查和稀释的新鲜精液,盛于消毒过的干燥试管中,覆盖一层经过消毒的液体石蜡,然后加塞盖紧封严,在常温的基础上逐渐降低温度至2~5℃时进行暂时保存,降温全过程为2~3小时,一般可以保存24小时以上。经过保存的精液,使用时必须逐步升高温度,在38~40℃温度下检查,合格的方可用于输精。
七、精液的运送
近程运送时可将精液在双层集精杯中盖好放入保温瓶里,周围用纱布包好,也可用灭菌小试管,将精液装好封严,放入保温瓶中运送。远程运送时将降温后的精液注入消毒过的试管内,上面覆盖一层消毒过的液体石蜡,管口用橡皮塞塞严,周围裹一层药棉并用纱布包好,试管外面贴上标明公羊号、采精时间、精液量和精液品质等的标签,装入保温瓶内,保温瓶内放置一些冰块或井水,即可运送。运送精液要尽量缩短时间,防止剧烈震动,同时,避免温度、光线、化学药品等造成的不良影响。
八、输精
1.输精时间
比较适宜的输精时间应在发情中后期(即发情后12~16小时)。如以母羊外部表现来确定母羊发情,上午开始发情的,可在下午配种1次,间隔8~10小时再配种1次;下午和傍晚开始发情的,在次日上、下午各输精1次。如母羊继续发情,可再行输精1次。
2.输精量
绵羊和山羊每次输精时,应输入前进运动精子数0.5亿个。对新鲜原精液,一般应输入0.05~0.l毫升,稀释精液(2~3倍)应为0.1~0.3毫升。
3.输精部位
母羊的输精部位应在子宫颈口内1~2厘米处,但由于母羊的子宫颈细长,管腔内有5~6个横皱褶,因此需要仔细操作,才能在深部(0.5~1.5厘米)输精。
4.输精方法(/yangyangjishu/)
①子宫内输精。将待配母羊牵到输精室内的输精架上固定好,将其外阴部和周围擦洗干净并消毒,输精员右手持输精器,左手持开腔器,先将开腔器慢慢插入阴道,再将开腔器轻轻打开,寻找子宫颈。如果在打开开腔器后,发现母羊阴道内黏液过多或有排尿现象,应先让母羊排尿或设法使母羊阴道内的黏液排净,然后将开腔器再插入阴道,细心寻找子宫颈。子宫颈附近黏膜颜色较深,当阴道打开后,向颜色较深的方向寻找子宫颈口,可以顺利地找到。找到子宫颈后,将输精管前端插入子宫颈口内1~2厘米深处,用拇指轻压活塞,注入原精液或稀释精液。
②阴道输精。如果遇到初配母羊,阴道狭窄,开腔器插不进或打不开,无法找到子宫颈时,只有进行阴道输精,但每次至少输入原精液0.2~0.3毫升。输精前,将装有精液的塑料管从保存箱中取出,放在室温中升温2~3分钟后,将管子的一端封口剪开,挤1小滴镜检合格后,将剪开的一端从母羊阴门向阴道深部缓慢插入,遇到有阻力时停止,再剪去上端封口,精液便自然流入阴道底部,然后拔出管子,把母羊轻轻放下,输精完毕。输精后的母羊应保持2~3小时的安静状态,不要接近公羊或强行牵拉,因为输入的精子通过子宫到达输卵管受精部位需要一段时间。
5.配种记录
①种公羊采精记录。主要记载采精日期和时间、射精量、精子活率、颜色、密度、精液稀释倍数、输精母羊号。
②母羊输精记录。主要记载输精母羊号、年龄、输精日期、精液类型、与配公羊号、精液稀释倍数。
(作者联系地址:甘肃省酒泉市南环西路26号酒泉市畜牧兽医局邮编:735000)
鳙的人工授精
首先要掌握好亲鳙发情产卵的征兆,适时地捕捞挤卵,同时也要掌握好成熟卵子和精子的生命力,使其在有效时间内完成人工授精,提高授精率。
人工授精的方法有三种,即:干法、半干法和湿法。
(1)干法用手压住生殖孔,将亲鱼提出水面,擦去鱼体表水分,另一人将卵子挤入擦千的授精盆内用同样方法从雄鱼体内直接挤出精液注入盆内,或用吸管吸取精液,然后注入盆内用羽毛或手轻轻搅拌,使卵、精充分混合。然后徐徐加入少量清水,静置 1 min左右,倒去污水,如此重复加清水洗卵3-4次即完成授精过程。最后可移入孵化器中孵化。
(2)半干法用吸管或去掉针头的注射筒吸取精液,加入少量 0.30%-0.5%生理盐水稀释后,倒在卵群中,按干法授精方法搅拌和洗卵.
(3)湿法先在授精盆内盛少量清水,然后把精、卵同时挤入盆内,再按干法人工授精方法操作。