现在流行的土鸡养殖模式。
奶牛养殖规模迅速发展,但是由于当地饲养管理水平较低,使奶牛隐性乳房炎的发病率居高不下。奶牛隐性乳房炎是制约奶牛行业发展的重要因素之一,由于发病隐蔽且不易察觉,因此给奶牛养殖业造成了巨大的经济损失。本实验通过对大庆地区4个规模牧场奶牛隐性乳腺炎发病情况进行调查,采用流行病学调查法、体细胞计数法、CMT、乳房炎检测试纸法检测奶牛隐性乳房炎的发病率,统计分析呼伦贝尔各个地区发病率与季度、胎次、泌乳阶段间的相互关系,分析其隐性乳房炎发病规律,为研究今后防控治疗奠定基础;采集四个地区隐性乳房炎的乳样进行细菌培养,并分离鉴定主要病原菌且进行相关药物敏感的试验。下面大家一起来看看。
奶牛乳腺炎是由病原微生物感染而引起乳房组织及乳头发炎的一种疾病。奶牛乳腺炎是困扰奶牛业发展的四大疾病之首，是最常见、治疗花费最高的疾病之一，尤其是隐形乳腺炎给奶牛场造成较大的经济损失，具有发病隐蔽性强，发病率高等特点。现通过调查大庆地区规模牧场奶牛隐性乳腺炎发病情况，分离主要致病菌，旨在为隐性乳腺炎的防治提供依据。
1材料与方法1.1试验对象
大庆地区4个规模牧场653头泌乳期，未发生临床性乳腺炎的荷斯坦奶牛。
1.2试验材料
丹麦福斯系列奶牛体细胞检测仪(FOSSMATIC5000)，平板，培养基，生化鉴定管和药敏片等其他常规试剂。1.3DHI检测
对653头奶牛进行逐头采样，并检查奶样是否出现异常和奶牛乳房状态。样品送往大庆市家畜良种繁育中心进行奶牛体细胞数量检测，超过25-50万个／mL即患有奶牛隐性乳腺炎。
1.4分离纯化
将患有隐性乳腺炎奶样摇匀，分别接种到血琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板上，恒温培养，观察记录菌落形态、大小及溶血情况，接种到肉汤培养基中增菌培养。
1.5生化鉴定用
触酶试验、兔血浆凝固酶试验、甘露醇发酵实验等葡萄菌属生化鉴定管进行鉴定。用CAMP试验、七叶苷水解试验、马尿酸纳水解试验和肉汤生长试验做链球菌鉴定。三糖铁斜面琼脂画线并穿刺培养后，用吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐发酵试验等进行大肠埃希菌鉴定。
1.6药敏试验
将分离鉴定的葡萄球菌、链球菌和大肠埃希菌分别接种到肉汤培养基培养，周围粘贴药敏片，培养24h，观察抑菌的直径。
2.结果分析
2.1流行病学调查结果
对653头奶牛进行奶牛隐性乳腺炎检测，发现有362头患有隐性乳腺炎，占总数的55.43%，
2..2细菌分离鉴定结果
在患有隐性乳腺炎的362份奶样中，分离到致病菌148株，其中金黄色葡萄球菌91株，占分离菌株的61.48%；无乳链球菌18株，占分离菌株的12.16%；停乳链球菌21株，占分离菌株的14.18%；大肠埃希菌12株，占分离菌株的8.10%；其他菌6株占4.05%。
2..3药敏实验结果
比较抑菌圈直径大小，判定结果。金黄色葡萄菌对环丙沙星、庆大霉素和头孢啶的敏感性高，对四环素、红霉素不同程度耐药。无乳链球菌对头孢他啶、克林霉素的敏感性较高，停乳链球菌对庆大霉素、克林霉素的敏感性较高，其他抗生素耐药。大肠埃希菌对卡那霉素、环丙沙星敏感，其他有一定程度的耐药。四种细菌均对青霉素耐药。
3讨论
目前已知奶牛乳腺炎的致病性微生物已超过150种，其中包括球菌、杆菌、支原体、真菌、酵母菌等，大部分感染是由细菌引起的。本实验在对大庆地区4个规模牧场653头进行隐性乳腺炎调查发现，奶牛隐性乳腺炎发病率为55.43%，这与翁春玲等报道的大庆地区奶牛隐性乳腺炎发病率为47.45%，存在一定差异，可能是调查牧场饲养方式、水平不同，调查季节、胎次和泌乳时间不同产生。在患有奶牛隐性乳腺炎的奶样中分离得到了四种主要致病菌，主要是金黄色葡萄球菌、停乳链球菌、无乳链球菌和大肠埃希菌，这与李静杰等报道的奶牛乳房炎主要致病菌相类似，主要致病菌随着乳腺炎防控措施强化、挤奶和环境卫生的改善而发生变化。抗生素作为治疗药物在乳腺炎的治疗中起到了重要作用，但长期应用抗生素导致了耐药细菌的生成。本实验发现的四种致病菌均对青霉素耐药，说明已经产生耐药菌株，在治疗奶牛乳腺炎时要尽量交叉用药，少用或禁用抗生素，开辟中草药、乳植菌等新的治疗途径，降低抗生素产生的危害，避免耐药菌株的出现。
相关知识
利用16SrRNA基因序列鉴定奶牛乳腺炎致病菌的技术方法
奶牛乳腺炎是困扰奶牛业发展的四大疾病之首，是最常见、治疗花费最高的疾病之一，主要是由病原微生物在奶牛乳腺内感染引起的炎症反应。据统计，我国每年因乳房炎造成的经济损失达135亿元。可以引起奶牛乳房炎的微生物种类有很多，如细菌、病毒、真菌、支原体等，目前从患有乳房炎的奶牛乳汁中分离到了160多种微生物，以细菌感染比较多见，引发该疾病的致病菌主要有葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌，这三种细菌引起的乳腺炎占总发病率的90%以上。本研究中，通过对乳腺炎患牛乳汁的病原菌培养、分离及药敏试验后，得到乳腺炎致病菌株，通过对其16SrRNA基因的序列进行分析，为该株致病菌的研究提供参考。
1、材料与方法
乳腺炎致病菌分离将乳腺炎患牛乳汁稀释后，分别接种到血琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板上，恒温培养，观察记录菌落形态、大小及溶血情况，接种到肉羊培养基中增菌培养。
分离菌株药敏试验将上述分离的致病菌分别接种到肉汤培养基培养，周围黏贴药敏片，培养24h，观察抑菌直径。
细菌学鉴定及致病性确定采用生化与革兰氏染色镜检，确定耐药菌形态，并进行细菌学分类。抽取分离培养后的菌液500μL，腹腔注射健康小鼠，24h后观察小鼠发病情况，如小鼠死亡则认定该菌株具有致病性。
细菌16SrRNA基因克隆与测序使用细菌基因组DNA提取试剂盒对菌液进行基因组DNA的提取，后利用细菌16SrRNA基因通用引物（F：57-AGAGTTTGATCMTG-GCTCAG-3acute;;R:5’-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’）进行细菌16SrRNA基因PCR扩增（扩增体积为50lJL;条件为：95℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s，30个循环；最后72℃终延伸10min，4℃结束反应），电泳以及胶回收后，连接pMD-18T载体连接克隆，经过筛选后将有16SrRNA基因序列插入的质粒提取测序。
序列BLAST比对测序后的细菌16SrRNA基因提交到NCBI，并利用BLAST软件进行序列比对，
2、实验结果
2..1致病菌株筛选以及鉴定结果
本次研究从27份乳腺炎患牛乳汁中分离出致病菌19株，其中经鉴定8株为葡萄球菌，6株为链球菌，5株为大肠杆菌。将上述分离菌株按照0.5mL/只剂量腹腔注射健康小鼠，小鼠在24h内全部死亡，因此分离菌株均有致病性。随机选取一株经细菌学鉴定为葡萄球菌的菌株，进行其16SrRNA基因扩增、克隆、测序后，进行序列分析。
2..2PCR扩增结果
利用细菌16SrRNA基因通用引物扩增后，1%琼脂糖凝胶电泳结果见图1。
M:DL2000，泳道l和2为扩增产物，泳道3为阴性对照
扩增后电泳图片显示，在1422bp处有一特异性扩增条带，与目的片段相符。
2..3细菌16SrRNA基因序列及BI．AST比对结果
将扩增的PCR产物在1.0%的琼脂糖凝胶上进行电泳分离后，采用DNA凝胶回收试剂盒进行回收纯化，将纯化的PCR产物与载体pMD-18T连接后转化E．colib121进行克隆，经过筛选后将有16SrRNA基因序列插入的质粒提取测序。序列提交到NCBI，并应用BLAST软件进行序列比对，结果显示：该序列与表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermi-dis)的16SrRNA基因序列相似性为99%，因此本次分离的菌株为表皮葡萄球菌。
3、讨论
表皮葡萄球菌是滋生于生物体表皮上的一种细菌，故名。前人对乳腺炎致病菌研究中发现，致病菌为葡萄球菌属的有50.7%为金黄色葡萄球菌，44.8%为表皮葡萄球菌，因此表皮葡萄球菌是乳腺炎致病的重要病原菌之一。
16SrRNA基因具有高度保守的一级结构，种间差异小，1995年Amann建立了以16SrRNA基因为PCR扩增靶分子的细菌快速分类鉴定的标准方法，该方法可以应用于细菌种、属和科的鉴定及系统进化分析等。目前基于高通量测序的细菌多样性检测，其理论基础就是基于细菌的该片段的此种特点发展而来的。
在临床条件下，快速、有效而准确的对病原作出鉴定对乳房炎的防治是非常重要的。运用PCR技术，对乳房炎病原菌的鉴定可以在数小时内完成，而且对种特异性16SrRNA基因扩增具有高敏感性和特异性，从而也提高了乳房炎病原的诊断水平，因此可以在乳房炎病原感染的早期或者在携带病原的奶牛乳汁中仅有很少量病原菌存在时就能被检测出来。
猪病的临床检查与猪病的流行病学调查要点
临床检查和流行病学调查是猪病临床诊断的基本内容。本文通过对猪病的临床检查和流行病学进行简要论述，提出了临床检查和流行病学调查应注意的几个要点，为猪病防治工作者提供参考。下面具体来了解一下：猪病的临床检查与猪病的流行病学调查要点。
1、临床检查
在实际临床工作中，对疾病进行临床诊断的基本内容就是针对病猪的临床检查和流行病学调查。采取临床检查，主要是为了发现并且搜集能够作为诊断根据的症状等其他相关的资料。常说的症状，就是指病猪所表现出来的病理性异常现象。因为每种疾病，也许都会引起病猪表现出很多的发病症状，而每个症状在疾病诊断的过程中，所处的地位和代表意义又都不一样，因此，一定要评价每个症状。
临床检查的基本方法包括视诊、触诊、叩诊和听诊。但是对于病猪进行听诊与叩诊工作，在很大程度上会受到病死猪只病理剖检、生理特点的限制；而实际的临床工作中，猪只常见的传染性疾病和多发性疾病所表现出来的患病症状以及发病原因和条件，又可以使得某些检查方法和内容，具备比较有意义和参考的价值。所以，针对患病猪只，在进行临床检查时要重点考虑以下几个方面。对病猪采取比较详细的视诊，以观察其整体的状态变化，尤其是要更加注意其发育程度、营养状况、精神状态、运动行为、消化和排泄活动及功能等内容。对病猪进行听诊时，要重点听其是否存在病理性声音，如咳嗽、喘息、喷嚏、呻吟等，特别要仔细听其喘息的特点和咳嗽的特征。认真测定猪只的体温、脉搏以及呼吸数等生理指标，尤其是体表温度的上升，通常是某些急性传染性疾病的提示条件。仔细对猪体的各个部位以及内脏器官进行检查，采取普遍检查措施的基础上，更要注重对其鼻盘的湿润度和颜色、皮肤出血点、疹块、疱疹等的观察；此外，还不能忽视通过软腹壁对腹腔器官进行深入的触诊工作。
2、流行病学调查
在养猪生产中，流行病学调查就是通过具体的问诊和查阅相关资料或者是直接深入发病现场，调查清楚病猪和猪群、环境条件以及发病情况和特点等具体情况。在了解致病原因、流行经过等方面，流行病学调查具有非常重要的意义，可以提供有价值的线索。在实际养猪工作中，会受到许多条件的约束，比如实际接触病猪的时间比较短，有的基本上没机会接触，病猪表现出的很多症状，以及查询到的资料都一定要通过询问才可以获得线索。如果要在对病猪进行临床诊断时得到重要的启示和明确的方向，就应该详细的进行流行病学调查，并且是在需要同时具备条件的情况下开展现场实际调查。流行病学调查应该着重进行以下几方面的工作。
了解患猪发病及其具体经过，比如通过猪只发病的时间，能够推测出疾病呈急性或者是慢性发展。通过猪只患病的主要表现，可得知疾病的主要症状，并且可以成为症状鉴别诊断的前提条件。询问猪只患病以后是否接受过治疗以及治疗效果，通过疗效验证，可以成为诊断的参考。比如用青霉素治疗发热的病猪，随后患猪迅速康复，是猪丹毒的提示参考；如果用磺胺类药物或者是青霉素治疗过咳嗽、喘息的病猪，并且效果良好，则提示为猪肺疫，可是如果治疗后不见效果，甚至是改用卡那霉素或者是庆大霉素以后，仅仅是症状好转、减轻的时候，并没有能够彻底根治，由于气候变化或者是饲养方式不当又导致疾病复发，就应该考虑气喘病；但是如果采用磺胺类药物、抗生素加以系统治疗也都没有效果，就应该考虑猪瘟。猪群中或相邻舍的猪只，是否有相似的病例同时或者是相继的发生，能够判断出疾病属于单发还是群发，而且是否具有传染性。询问病史以及疫情。猪只饲养场曾经出现过何种疫情，曾经是否发生过类似的疫病，发病经过和结果如何。将本次疫病与曾经发生疫病的关系加以分析，特别对于能够作为地区性常在疫病的判断和分析有利。
了解防疫情况及其效果。应该掌握饲养场的防疫制度及其贯彻情况，消毒设施是否具备，对于病死猪的处理措施，这些在对疫病传播的分析上具有一定的实际意义，如果猪场中的防疫制度不存在或者是即使制定了防疫制度但是确没有严格的进行执行，仅仅是随便从外地引进猪只没有检疫或者是存在频繁人员往来的情况却未采取消毒措施。
认真的了解相关猪只的饲养、管理和卫生情况。猪只饲槽和运动场的卫生条件以及具体状况，粪便的清除以及处理情况。具体的比如圈舍泥泞、饲槽不卫生，通常就会给仔猪副伤寒的发生提供条件；饲养环境不整洁以及母猪乳头不干净，都可以导致大肠杆菌病的发生。猪只饲料的组成、种类、质量与数量，贮存与调制方法和饲喂制度情况，如饲喂方式不合理会导致一些代谢紊乱，比如佝偻病和白肌病等。
1、临床检查要点
临床检查的基本方法是视诊、触诊、叩诊和听诊。但猪的解剖、生理特点（特别是育肥猪）使得一般的听诊与叩诊方法的应用受很大的限制；而猪的常见传染病及多发病所表现的症状及发病原因及条件，又使某些检查方法和内容，具有较为突出的意义和价值。因此，对病猪的临床检查应着重以下几点：
（1）通过详细的视诊观察其整体状态变化，特别是对其发育程度、营养状况、精神状态、运动行为、消化与排泄的活动和功能等项内容，更应注意。
（2）注意听其病理性声音，如咳嗽、喘息、喷嚏、呻吟等，尤其注意其喘息的特点和咳嗽的特征。
（3）测定体温、脉搏及呼吸数等生理指标，特别是体温的升高，常可提示某些急性传染病。
（4）细致检查猪体各部位及内脏器官，在普遍检查的基础上，对鼻盘的湿润度和颜色，皮肤的出血点、疹块、疱疹等更应注意；通过软腹壁对腹腔器官进行深入触诊，也不应忽视。
2、流行病学调查要点
由于在工作条件的约束下，实际接触病猪的时间短，甚至机会少，很多症状、资料都须经过询问才能得到线索。详细的流行病学调查及在需要、条件许可下的现场实际调查，能为临床诊断提供重要的启示和明确的方向。流行病学调查应侧重以下几点：
2.1问发病表现和经过
发病的主要表现，可提示其主要症状，并为症状鉴别诊断提供前提。是否治疗，效果如何？根据疗效验证，作为诊断参考。如对发热的病猪，经用青霉素治疗，迅速康复，可提示为猪丹毒；对咳嗽、喘息的病猪，应用磺胺或青霉素，收到良好效果，则主要考虑为猪肺疫，假若无效甚至改用卡那霉素或庆大霉素也仅见一时的好转、减轻，并未根治，其后因气候变化或饲养失宜而复发，则可能为气喘病；而应用磺胺类、抗生素的系统治疗均无效，则应怀疑猪瘟。猪群中或同村、邻舍的猪，是否有类似的病例同时或相继发生，可以判断是单发、群发，以及是否有传染性。
2.2问病史及疫情
猪群过去有什么疫情？过去有否类似疫病的发生？其经过及结果如何？分析本次疫病与过去疫病的关系，尤其有利于某些可作为地区性常在的疫病（如猪丹毒、气喘病等）的判断、分析。以及有否和疫病有关系的条件及机会，在推断疫病的来源方面，可供参考。
2.3问防疫及其效果
防疫制度及其贯彻情况如何？有否消毒设施？病死猪尸体的处理怎样？在分析疫病的传播上有一定的实际意义，如猪场中没有合理的防疫制度或虽有但执行不严格，随意由外地引进猪不检疫或人员往来频繁而不消毒，病死猪尸体随便处理等。
2.4详细了解饲养管理情况
猪舍饲槽、运动场的卫生条件状况如何？粪便的清除及处理情况怎样？如圈舍泥泞、饲槽不洁，常为仔猪副伤寒的发病条件；环境不卫生及母猪乳头不洁可成为大肠杆菌病的致病因素。饲料的组成、种类、质量与数量，贮存与调制方法及饲喂制度如何？饲喂不当可引起某些代谢紊乱。如仔猪营养不良、佝偻病、白肌病等。
随着养猪业向集约化、规模化的发展，猪群群发性疾病的诊断已成为兽医工作者在猪病防制领域的一项重要任务。因此，在疾病诊断中还必须注意对猪群发性疾病的诊断，并做好群发病的防治工作。