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今年5月美国佛罗里达大学兽医学院的KuttichantranSubramaniam等研究者首次报道位于美国中西部地区的循环流水养殖的罗非鱼感染传染性脾肾坏死病毒(ISKNV),并造成大量死亡。这是目前世界上首次报道传染性脾肾坏死病毒感染罗非鱼并且引起大量死亡。
传染性脾肾坏死病毒在分类上属于虹彩病毒科,细胞肿大病毒属,为有囊膜的二十面体结构,直径约为150nm。由于可引起感染鱼类的组织上形成肿大细胞而得名。感染淡水养殖鱼类时习惯上称传染性脾肾坏死病毒,感染海水鱼类则习惯上称真鲷虹彩病毒。该病毒对我国主要养殖的淡水鲈形目鱼类(鳜、笋壳鱼、加州鲈等)和海水鱼类(美国红鱼、尖吻鲈、篮子鱼、海鲈、石斑鱼、黄鳍鲷等)形成广泛的危害,能引起淡水和海水养殖鱼类的重大疾病。
这次报道的罗非鱼脾肾坏死病毒病发生在美国中西部地区,淡水循环流水养殖,主要感染罗非鱼幼鱼阶段,发病罗非鱼鱼苗体长从3.6cm到7.5cm不等,患病罗非鱼死亡率高达50%-75%。
临床症状主要表现为患病罗非鱼呈现昏睡、白鳃,体腔有大量腹水。ISKNV主要侵袭鱼种的肾脏和脾脏,并表现为受感染细胞明显肿大和造血器官弥散性坏死。在发病鱼的脑组织、脾脏、肝脏、肾脏、肾小球、肠系膜、心脏等组织出现不同程度的肿大细胞(见图中箭头指示),肿大细胞胞质中含有包涵体。该病毒主要通过垂直传播和水平传播两种途径感染健康罗非鱼。垂直途径是通过亲子代纵向传播的,水平途径是通过口、消化道和水介质横向传播的。
罗非鱼是我国南方重要的养殖鱼类,细胞肿大虹彩病毒又是我国目前海水、淡水养殖鱼类的重要病害,由于之前我国缺乏对罗非鱼该病毒感染的系统监测,对我国养殖罗非鱼是否有该病毒病发生不得而知,今后将是罗非鱼养殖重点检测病害。仅从发病症状不能确诊该病,现场临床诊断建议结合发病症状做脾脏和肝脏、肾脏的组织印片,经过染色后观察是否有肿大细胞出现,是诊断细胞肿大虹彩病毒比较简捷而有效的方法,也可以将脾脏、肾脏、肝脏等内脏组织用90%酒精保存送实验室用PCR方法进行病毒检测。
相关知识
蛙虹彩病毒也能感染罗非鱼引起大量死亡
早在1997年,澳大利亚詹母斯库克大学的ArielE等研究报道了养殖罗非鱼感染蛙虹彩病毒(Ranavirus)病的事件,感染病毒的罗非鱼鱼种于两个月内死亡率达到100%。这给罗非鱼的养殖带来严重的经济损失。
蛙虹彩病毒属于虹彩病毒科,蛙虹彩病毒属,病毒粒子呈二十面体,轮廓为六角形,有囊膜。大量病毒颗粒堆积可呈晶格状排列,直径一般为120~300nm。蛙虹彩病毒主要感染鱼类、两栖类和爬行类动物。感染鱼类包括加州鲈、石斑鱼、河鲈、虹鳟等,侵袭范围从几克的苗种到几百克的成鱼,发病水温在20~28℃,次高温时发病。目前我国养殖的加州鲈、石斑鱼每年都有发病病例。
该次研究首次报道蛙虹彩病毒感染罗非鱼鱼苗。该罗非鱼养殖场采用网箱养殖方式,水温恒定在24℃。患病鱼表现出典型的旋转性综合征(Spinningtilapiasyndrome,STS)症状,时而在水体中呈螺旋状快速游动,时而停止在水底,时而呈45°悬挂在水面。感染病毒的罗非鱼呈现体色发黑、鳃丝苍白、眼球突出和腹水症状,有些鱼颌下皮肤出现红斑,内脏器官尤其是肝脏明显发白,脾脏、肾脏和心脏出现严重的出血性坏死,继而形成坏疽,肾小管收缩,肾间质出血并伴有大量炎性细胞浸润,大多数肌肉出现灶性溶解(如图标识所示)。蛙病毒不但可以通过垂直传播途径,还可以通过水平传播途径感染健康罗非鱼,将具有明显STS症状的罗非鱼置于健康鱼群中,发现健康鱼逐渐出现STS症状,一个月内病鱼死亡率约20%。
对于罗非鱼感染蛙虹彩病毒病的诊断,可以通过典型的旋转性综合征初步判断,但由于病毒感染后对机体产生免疫抑制作用,很快会诱发一些条件致病菌感染,所以只靠临床症状诊断不够准确。特别是该病的打转、鳃丝贫血、眼球突出、腹水等症状与目前高发的罗非鱼链球菌十分相似,容易误诊。进一步的确诊还要通过流行病学调查、PCR病毒检测、细菌分离培养等措施。采用分子生物学方法,如PCR法和LAMP法,是最为准确和特异的诊断措施。
虹鳟传染性造血组织坏死病
疾病名称传染性造血组织坏死病
为害对象 虹鳟鱼
疾病概述
本病约在1985年传入我国东北地区,主要为害虹鳟鱼苗和鱼种,大多呈急性暴发,死亡率高达50%-100%。
病原 病原为传染性造血组织坏死病毒(Infectious hematopoictic necrosis virus,IHNV)。
症状
发病初期,病鱼呈昏睡状,摇晃摆动状游动,继而突然狂游,旋即死亡,是本病特征之一。病鱼体色发黑,眼球突出,腹部膨大,有时有体表充血现象,肛门处常拖有1条较粗长的白色黏液便,是本病的又一特征。刚脱卵的鱼苗,其卵黄囊肿胀并有出血斑。鳃贫血,肝、脾、肾色浅,而肌肉、脂肪、鳔、心包膜、腹膜上可见出血斑点。
发病规律 本病以刚孵出的鱼苗到摄食4周龄的鱼种发病率最高,一龄鱼种也偶有患病,二龄以上的鱼不发生此病。以水温8-10℃时发病率最高,超过15℃以上停止发病。
某鸭场鸭传染性浆膜炎感染的诊治
鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌引起的鸭、鹅、火鸡等多种禽类的急性或慢性传染病,又称鸭传染性浆膜炎和鸭疫里氏菌病。多发生于2~7周龄鸭,恶劣的环境条件可以促发感染,发病率5%~90%,死亡率可高达80%。该病呈急性或慢性败血症,以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎等为特征,该病给养鸭业造成了巨大的经济损失,已成为危害养鸭业的主要细菌性传染病之一。患鸭主要症状为行动迟缓,昏睡,咳嗽,打喷嚏,眼鼻流浆性、黏性或脓性分泌物。拉稀薄的绿色粪便。濒死期病鸭出现共济失调、痉挛性点头等神经症状。剖检可见心包积液,心外膜增厚、瘀血、水肿,有黄色渗出物包裹整个心脏;肝表面覆有一层灰白色或灰黄色纤维素膜。肝肿胀、质脆,呈土黄色或棕红色。
1 流行情况及临床症状
河南新郑市某肉鸭养殖场的1 800羽47日龄肉番鸭群中,大群精神正常,采食量下降。每天死亡5~8只,患鸭主要症状为行动迟缓,昏睡,咳嗽,打喷嚏,眼鼻流浆性、黏性或脓性分泌物,拉绿色稀便。
2剖检病变
剖检病鸭12只,可见心脏病变:心包积液,心包膜表面覆盖淡黄色的纤维素性渗出物。肝脏病变:肝肿大,实质较脆,呈土黄色或灰黄色纤维素性膜状物,容易剥离。胆囊肿大,胆质黏稠,呈黄褐色。气囊表面有纤维素性渗出,背下及肛门周围可见坏死性皮炎,皮肤呈黄色。其他内脏器官未见病变。
3疾病诊断
3.1 实验室检查
3.1.1 镜检无菌采取疑似鸭疫里氏杆菌的肝脏、脾脏等病料直接触片,革兰氏染色镜检。
3.1.2细菌分离与纯化无菌采取病鸭的肝脏、脾脏等组织接种于巧克力平板上,初次分离培养需要供给5%~ 10%的二氧化碳,在巧克力培养基上,二氧化碳培养箱中,37℃培养24 h。观察菌落形态,分别挑选单个疑似菌落涂片染色镜检,确定为待检目的菌后接种于肉汤中,置于37℃温箱中培养24 h后,检测无杂菌生长者,置于4℃ 冰箱备用。
3.1.3细菌的形态及培养特性的观察革兰氏阴性小杆菌,无芽孢,不能运动,纯培养菌落涂片可见到菌体呈单个,成对或呈丝状,菌体大小不一。将上述分离纯化后的细菌分别接种到巧克力培养基中,37℃条件下分别培养,观察其生长情况,同时做涂片革兰氏染色镜检。
3.1.4细菌的生化特性鉴定取经24 h纯培养的鸭疫里氏杆菌疑似分离菌株分别接种于葡萄糖、蔗糖、硫化氢、硝酸盐等生化培养基上。置37℃培养箱中培养18.24 h,观察记录生化反应结果。
3.2药敏试验
3.2.1采用纸片扩散法将巧克力平板培养24 h的分离细菌的纯培养物作为菌种,分别挑取待试细菌于少量生理盐水制成细菌混悬液,用灭菌涂布棒在巧克力平板上均匀涂布,最后沿平板边缘涂布一圈。加盖后静置5 min,用镊子将药敏片平放在平板上,并轻压使其紧贴平板表面。将贴好纸片的平板于37℃培养24 h后观察结果。
3.2.2结果判定按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准,0为不敏;10 mm以下判为低敏;10~15 mm判为中敏;15~20 mm判为高敏;20 mm以上判为极敏。
3.3 实验室诊断
3.3.1镜检无菌采取病鸭的肝脏直接涂片镜检,革兰氏染色镜检发现待检物中有大量的革兰氏阴性、两端钝染、单个或成对排列的短小杆菌。
3.3.2细菌培养与纯化将病鸭的病料培养物经培养分别分离纯化出疑似鸭疫里氏杆菌的优势菌群。
3.3.3细菌培养性状观察无菌采取病鸭的肝脏脾脏等病料,接种于巧克力培养基中,37℃条件下培养;同时,接种于麦康凯培养基上培养,以便区别于大肠杆菌。挑取单个菌落,培养48 h后,在麦康凯培养基上不生长,巧克力培养基上生长为无色菌落,呈圆形、光滑、突起、有闪光的奶油状的小菌落,直径约0.5~1.5 mm;肉汤培养基呈轻微浑浊,试管底部有少量沉淀物;初步怀疑病鸭感染的为鸭疫里氏杆菌。
3.3.4生化试验结果分离菌株接种于细菌微量生化管内,按常规进行氧化酶、糖(醇及苷)类代谢、硫化氢、硝酸盐还原等理化特性测定。分离菌株不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇,不产生硫化氢,vP试验和MR试验均为阴性,不分解尿素,接触酶试验阳性,过氧化氢酶阳性,不液化明胶,无运动力,与鸭疫里氏杆菌的生化结果相吻合。参照《伯杰氏细菌鉴定手册》可鉴定该菌为鸭疫里氏杆菌。
4小结与讨论
4.1诊断结果
根据该病的流行病学、临床症状、剖检变化以及结合分离出菌株的形态特征、培养特性、生化试验结果等将该肉鸭场发生的疫情确诊为鸭疫里氏杆菌感染。
4.2实行全进全出的饲养管理制度,杜绝混养
加强饲养管理,改善饲养条件,供给优质、全面、充足的饲料,做好通风换气工作,保持合理的温度、湿度和饲养密度,及时更换垫料,尽量减少不良应激(如淋雨、惊吓、高温、寒冷等)措施,防止鸭受到外伤,保持水域活动清洁、卫生,有效降低该病感染和发生。
4.3严格检疫,做好消毒接种工作
对种鸭场、孵化场加强监督管理,做好鸭瘟、鸭病毒性肝炎、番鸭三周病、禽流感等疾病的免疫接种工作,对饮水器、料槽、场地、水池、棚舍等定期进行全方位清洁、消毒,建立严格的定期消毒机制,确保生产环境、圈舍、笼具卫生,以减少该病的发生。
4.4加强免疫防治
对l~2周龄的雏鸭免疫接种2次1型、2型、5型鸭疫里氏杆菌制备的三价灭活苗可起到70%~85%的保护作用;雏鸭免疫接种1型、2型、5型鸭疫里氏杆菌的四价铝胶佐剂灭活疫苗,首免后16 d免疫鸭就可以获得完全保护, 30 d后保护力开始下降;1日龄雏鸭饮水和气雾免疫接种 1型、2型、5型鸭疫里氏杆菌的三价弱毒活苗,对攻毒和野外感染都有较好的保护效果。适时接种疫苗,购鸭苗入场 7~10 d内应皮下注射,并于第1次免疫后10~15 d,加强免疫一次。
4.5 治疗
4.5.1做好隔离隔离病鸭,清理场内粪便并进行无害化处理。
4.5.2采取多种治疗治疗期间配合消毒工作,一是治疗期间,每天用消毒液对全场地面进行彻底消毒,以后每隔2 d进行彻底清扫、消毒一次。
4.5.3适时补充维生素等多种维生素、电解质、各种微量元素适时补充。
鸭疫里氏杆菌易产生耐药性,药物治疗应采取多种药物交替使用或联合应用。由于在养鸭生产中广大养殖户长期大量滥用抗生素,使鸭疫里氏杆菌对药物产生抗药性,因此在临床用药中应充分考虑,最好是在药敏试验的基础上进行用药。在实际用药时,尽量选择高度敏感的药物,避免同一药物连续使用,同时药物剂量要充足,可在发病日龄前进行预防性投药,或发病后做紧急治疗。在使用抗菌药物的同时,为避免肠道内正常菌群失调,选用微生态制剂,调整体内微生态平衡以提高疗效。
4.6预防
针对此病应采取综合防治措施,主要是搞好环境卫生,对禽舍和用具经常清洁和消毒,注意通风,控制鸭舍灰尘、温度、湿度,减少应激诱因。加强饲养管理,勤换饮水,认真检查水源是否被污染。对环境、饮水、空气、孵化设备应定期进行消毒;防止饲料、饲具等被粪便污染。必须注意在免疫前后做好注射器械的消毒工作,并在执行免疫的过程中,对针头勤消毒、勤更换。要彻底消除垫料中的坚硬锐利物如铁丝,碎砖石等。要提高工作人员的责任感,掌握正确的抓鸭方法。在鸭舍内勿喧哗,不可嬉戏打闹,以免踩伤踏伤鸭只。要加强垫料的管理使其保持干燥,并定期更换潮湿的垫料,做好全场消毒和鸭舍的带鸭消毒。育雏阶段的饲养管理、卫生条件不良是引起此病暴发的主要诱因。育雏室内昼夜温差大、通风不好、拥挤、阴暗潮湿等因素都能促使该病的发生。